Fitoquímica De Lippia Citriodora K cultivada en
Ecuador y su actividad biológica
Phytochemistry of Lippia citriodora K grown in
Ecuador and its biological activity
Resumen
Se realizó un estudio fitoquímico de metabolitos secundarios, actividad antimicrobiana y letal del extracto metanólico de las partes
botánicas de Lippia citriodora K (cedrón). Se detectó la presencia taninos, polifenoles, triterpenos y esteroles insaturados para las
hojas, flores y tallo; fenilpropanoides y catequinas para tallos y flores; alcaloides para hojas y flores; saponinas para hojas y tallos.
Además, las flores exhibieron la presencia de cumarinas y metilencetonas. Todos los extractos metanólicos mostraron una acción
bactericida alta contra cepas de Escherichia coli, Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa, a excepción del extracto de
las flores que exhibió una actividad antibacteriana moderada o mediana contra cepas de S. aureus. Además, se observó un efecto
antifúngico moderado del extracto de las hojas, y una actividad alta de los extractos del tallo y flores, contra la cepa del hongo Can-
dida albicans. Todos los extractos mostraron letalidad significativa (<1000 µg/ml) frente a nauplios de Artemia salina a las 24 h de
exposición (168,77, 82,19 y 172,76 µg/ml para las hojas, tallo y flores, respectivamente); donde el extracto del tallo presentó mayor
letalidad con CL
50
de 82,19 µg/ml, considerado altamente tóxico según CYTED. Se puede inferir que la especie L. citriodora es una
fuente promisoria de metabolitos secundarios bioactivos con actividad farmacológica.
Palabras Clave: actividad tóxica, actividad antimicrobiana, Artemia salina, cedrón, metabolito secundario.
Abstract
This research was based on a phytochemical study of secondary metabolites, lethal and antimicrobial activity of methanolic extract
of botanical organs Lippia citriodora K (lemon verbena). It was detected the presence of tannins, polyphenols, triterpenes and
unsaturated sterols for leaves, flowers and stem; phenylpropanoids and catechins for stems and flowers; alkaloids for leaves and
flowers; saponins for leaves and stems. In addition, the flowers exhibited the presence of coumarins and methylenketones. Methanolic
extracts showed high bactericidal action against strains of Escherichia coli, Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa, in
the antimicrobial bioassay, except for the flowers which exhibited moderate activity against S. aureus strains. Furthermore, moderate
antifungal effect was observed for leaves extract and high activity for stem and flowers extracts against the strain of Candida albicans
fungus. All extracts showed significant lethality (<1000 μg/ml) against A. salina nauplii at 24 h of exposure (168.77, 82.19 and 172.76
μg/mL for leaves, stems and flowers, respectively); where the methanolic extract of the stem showed the highest lethality with LC
50
value of 82.19 μg/ml, considered highly toxic according to CYTED. It can be inferred that L. citriodora is a promising source of
bioactive secondary metabolites with pharmacological activity.
Keywords: Arima models; delinquency rate; early warning; risk of default; time series.
Recibido: 21 de Agosto de 2018
Aceptado: 03 de Diciembre de 2018
Elington, Vélez 1; Haydelba, D’Armas 2*; Carmita, Jaramillo-Jaramillo 3; Ana, Echavarría-Vélez 4; Chinwe Christy, Isitua 5
1
BQF en Bioquímica y Farmacia; Universidad Técnica de Machala; Provincia del Oro, Ecuador; elingtonvelezparraga@gmail.com
2
PhD en Química; Universidad Estatal de Milagro (UNEMI); Docente Ocasional; Milagro, Provincia de Guayas, Ecuador; Investigador,
Universidad de Oriente (UDO); Cumaná 6101, Sucre, Venezuela; hdarmasr@unemi.edu.ec; http://orcid.org/0000-0001-9301-3801.
3
MSc en Fitofármacos; Universidad Técnica de Machala (UTMACH); Docente Titular; Provincia del Oro, Ecuador; cjaramillo@utmachala.
edu.ec
4
PhD en Ing. De Alimentos; Universidad Estatal de Milagro (UNEMI); Docente Ocasional; Milagro, Provincia de Guayas, Ecuador;
aechavarriav@unemi.edu.ec
5
PhD en Microbiología; Afe Babalola University; Docente e Investigador; Ado-Ekiti, Ekiti State, Nigeria; christykings@yahoo.com
*Autor para correspondencia: hdarmasr@unemi.edu.ec
Revista Ciencia UNEMI
Vol. 12, N° 29, Enero-Abril 2019
, pp. 09 - 19
ISSN 1390-4272 Impreso
ISSN 2528-7737 Electrónico
http://dx.doi.org/10.29076/issn.2528-7737vol12iss29.2019pp09-19p
Volumen 12, Número 29,
Enero-Abril 2019
, pp. 09 - 19
I. INTRODUCCIÓN
Lippia es un género de plantas con flores perteneciente
a la familia Verbenaceae. Contiene alrededor
de 220 especies con diversas aplicaciones etno-
farmacológicas. Una miríada de fitoconstituyentes
biológicamente activos abunda en Lippia (Okhale et
al, 2016).
Las plantas pertenecientes a este género han sido
ampliamente utilizadas en etnobotánica en América
del Sur y Central y en África tropical como alimentos,
medicinas, edulcorantes y saborizantes de bebidas
(Funari et al., 2012). Las especies de Lippia tienen
una larga historia de uso en aplicaciones medicinales
tradicionales, algunas de las cuales tienen sido
científicamente validado Se usan principalmente
en el tratamiento de trastornos respiratorios y
gastrointestinales. Además, exhiben actividades
antipalúdicas, espasmolíticas, sedantes, hipotensivas
y antiinflamatorias (Abena et al., 2001; Jigam et al,
2009).
Las composiciones químicas de los aceites esenciales
de las especies Lippia varían notablemente dando
lugar a quimiotipos. Estos dependen de factores
geográficos,
factores
genéticos,
condiciones
ambientales, estado nutricional y los efectos
del daño mecánico o herbivoría. En términos
generales, el limoneno, el p-cimeno y el β-cariofileno
desprendieron los aceites esenciales de las especies
conocidas de dicho género y podrían considerarse
marcadores quimiotaxonómicos (Okhale et al., 2016).
Lippia citriodora Kunth (cedrón) o su sinónimo
científico Aloysia triphylla es una planta perenne
del tipo arbusto que está ampliamente distribuida
en zonas tropicales, subtropicales, centrales de
Sudamérica y en África. La planta, que florece en
suelo arcilloso, se cría a partir de semillas y esquejes.
Las hojas se usan para dar sabor a bebidas, postres,
ensaladas y jaleas de frutas y para condimentar los
alimentos. Una decocción hecha con hojas y flores se
da como febrífugo, sedante y antiflatulento (Omollo-
Ombito et al, 2014).
Herranz-López et al. (2015) mencionan que las
hojas, flores y las partes aéreas de L. citriodora, se
usaron en medicina popular para el tratamiento
de enfermedades respiratorias y enfermedades
del sistema digestivo. Además, en su investigación
observaron que los polifenoles identificados en
los extractos disminuyeron la acumulación de los
triglicéridos (TG) y la generación de especies reactivas
de oxígeno (ROS) que fomentan la formación de
radicales libres.
Hace casi dos décadas, Ávila et al. (1999) reportaron
en la literatura aspectos sobre la bioactividad y
fitoquimica de la especie L. citriodora, indicando
que los verbascósidos (derivados fenilpropanoides)
aislados de la misma y de otras especies del género
Lippia parecían ejercer una actividad antimicrobiana
más potente contra bacterias Gram-positivas que
contra bacterias Gram-negativas.
En otro estudio más reciente, se aislaron tres
compuestos fenólicos a partir del extracto en acetato
de etilo de hojas de L. citriodora. Los tres compuestos
se analizaron para actividades analgésicas,
antipiréticas, antioxidantes y antiinflamatorias tanto
en ratones como en ratas y mostraron una buena
actividad (El-Hawary et al., 2012). Adicionalmente,
otros investigadores reportaron que cedrón contiene
cantidades considerables de polifenoles, es decir de
flavonoides y ácidos fenólicos (Zamorano et al., 2006;
Álvarez, 2012).
Recientemente, ha sido publicado un estudio sobre la
identificación de cinco nuevos compuestos, junto con
26 conocidos, a partir del extracto de etanol al 95%
de partes aéreas de Lippia triphylla recolectada en
Ruanda (África). Sus estructuras fueron elucidadas
por métodos químicos y espectroscópicos. Todos
los compuestos fueron probados por sus efectos
de inhibición de la acumulación de antioxidantes
y triglicéridos en células L6 y células HepG2,
respectivamente. Este estudio proporcionó respaldo
científico parcial para el desarrollo y la utilización de
partes aéreas de L. triphylla (Zhang et al., 2015).
El aumento de la confianza en el uso de plantas
medicinales y productos derivados se ve reflejado
por su empleo mayoritario tanto en países en vías de
desarrollo, como en los países desarrollados, y esta
realidad es muy notable en Ecuador al poseer una
enorme biodiversidad (Oliveira et al., 2005).
D’Armas et al. Fitoquímica de Lippia citriodora K cultivada en Ecuador y su actividad biológica.
En Ecuador se comercializan varias plantas
medicinales, a las cuales se les da diversos usos
además del terapéutico, pero aún no existen estudios
científicos para la gran cantidad de especies vegetales
que cuantifiquen cuan valiosas son en cuanto a las
alternativas terapéuticas que se les puede dar. El
cedrón es una de las especies vegetales más utilizadas
en Latinoamérica, debido a sus propiedades
farmacológicas, habitualmente para tratar dolores
abdominales.
En el país existen también muchas plantas con falta
de estudio en cuanto a la actividad antimicrobiana o
letal que puedan generar, y que estas podría ser muy
útiles en el tratamiento de las infecciones microbianas
que en la actualidad están apareciendo y que son
cada vez más difíciles de combatir, tal es el caso de
la especie en estudio, que al poseer metabolitos
secundarios de diversas familias dependiendo del
hábitat, depredadores etc., éstos podrían actuar como
mecanismo de defensa ante factores patógenos como
hongos, bacterias, parásitos, etc. (Kummerer, 2004).
Por otra parte, el aumento de microorganismos
resistentes a los agentes antimicrobianos es uno
de los principales problemas al que se enfrenta la
ciencia médica en el tratamiento de las enfermedades
infecciosas. La búsqueda de nuevos agentes
antimicrobianos potentes con mecanismos de acción
que actúen contra bacterias u hongos resistentes a
los antimicrobianos disponibles en la actualidad,
es de vital importancia. Por tanto, es necesario
realizar investigaciones que permitan evaluar plantas
medicinales, de amplio uso etnobotánico en una o
varias zonas del Ecuador, como fuentes de nuevos
fármacos (Kummerer, 2004).
En el presente trabajo de investigación, se evaluó el
potencial farmacognóstico (composición química de
L. citriodora mediante ensayos cualitativos) de los
órganos botánicos de la planta (flores, tallos y hojas),
y se determinó su bioactividad a través de bioensayos
de actividad antimicrobial y letalitad o toxicidad con
larvas de Artemia salina.
II. MATERIALES Y MÉTODOS
Recolección de las muestras
Los ejemplares de la especie vegetal L. citriodora
fueron adquiridos en agosto del 2014 en el mercado
central de la ciudad de Machala (Provincia del Oro:
coordenadas 3°16′00″ S 79°58′00″ O; 65-85 % de
humedad relativa; temperatura y altitud promedio de 26
°C y 12 m respectivamente), Ecuador. Según su calidad
organoléptica, se seleccionaron los órganos botánicos
sanos (hojas, tallo y flores) para realización de los análisis,
siendo procesados en el laboratorio de Farmacia de la
Universidad Técnica de Machala, sin almacenamiento
previo. La identificación de la especie fue realizada por
el Botánico Jesús Inca del Herbario de Quito, Ecuador.
Obtención de los extractos
De cada planta se utilizaron las hojas, tallo y flores,
éstas se lavaron con agua destilada y secadas al aire por
24 horas y posteriormente en una estufa (Memmert SNB
400 con flujo de aire) a 37 °C por 24 horas. Luego, se
trituraron con un molino (Lab. Mill serial No. 56969,
Type AR 400 Erweka®, Alemania) y se pesaron. Los
extractos se obtuvieron por maceración de 200 g de las
partes trituradas con metanol 100% puro por 72 h. Los
extractos fluidos se filtraron y el residuo se re-extrajo
con metanol por 48h; los filtrados combinados fueron
concentrados a presión reducida (aprox. 11 mbar) y
40 ºC en un rotaevaporador marca Heidolph (Modelo
Hei-VAP Valor, Alemania) obteniéndose el extracto
metanólico crudo por especie. Se determinó la masa de
cada uno de los extractos de las plantas estudiadas.
Análisis fitoquímico
Para detectar las familias de compuestos presentes en
los extractos estudiados se realizaron pruebas químicas
específicas, las cuales permitieron apreciar la posible
presencia o ausencia de cumarinas y fenilpropanoides
(Murillo y Méndez, 2007); alcaloides, saponinas,
glicósidos cardiotónicos, glicósidos cianogénicos,
esteroles insaturados y triterpenos pentacíclicos, taninos
y polifenoles, antraquinonas y metilencetonas, siguiendo
la metodología de Marcano y Hasegawa (2002).
Actividad antimicrobiana
Para determinar la actividad antibacteriana se utilizó
la técnica de difusión en agar, según la metodología descrita
por Bauer et al. (1966), empleándose cepas de bacterias
certificadas: una Gram positiva (Staphylococcus aureus)
y dos Gram negativas (Escherichia coli y Pseudomonas
aeruginosa), pertenecientes a la Colección Americana de
Cultivos Tipo (ATCC). La misma consistió en impregnar
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discos estériles de papel de filtro Whatman Nº 3 de 5
mm de diámetro con 10 µl de una solución preparada
(20 y 40 mg. ml
-1
) del extracto a analizar. Estos discos
se colocaron dentro de cápsulas de Petri que contenían
agar Mueller-Hinton, inoculadas con una suspensión
bacteriana de concentración conocida (10
8
bacterias. ml-
1), preparada por comparación con un patrón comercial
estándar Nº 0,5 de McFarland. Posteriormente, las
cápsulas se preincubaron a 5ºC durante 12 h, para
permitir la difusión del extracto, y luego, se incubaron
a 37ºC durante 48 h, para permitir el crecimiento
bacteriano. Las zonas claras que se formaron alrededor
de los discos, se consideraron halos de inhibición, los
cuales fueron medidos, registrando para cada caso el
diámetro en milímetros de los halos de inhibición del
crecimiento bacteriano.
Para evaluar la actividad antimicótica se siguió la
técnica descrita por Madubunyi (1995), utilizando cepas
de un hongo patógeno (Candida albicans) de origen
clínico. Dicha cepa se incubó por un periodo de 5 a 7
días a temperatura ambiente en un tubo con Agar Papa
Dextrosa (PDA). Al cabo de este tiempo, se añadió 10 ml
de agua destilada estéril al tubo, se agitó vigorosamente
y se filtró a través de un embudo con gasa previamente
estéril, para así obtener una suspensión de esporas. La
cepa de C. albicans se trató siguiendo la metodología
de la comparación con un estándar de turbidez 0,5
McFarland. La solución espongorial obtenida se colocó
sobre cápsulas de Petri, previamente preparadas con
PDA, empleando hisopos estériles. Posteriormente, se
colocaron los discos de papel Whatman Nº 3 de 5 mm
de diámetro impregnados previamente con el extracto, y
luego, se incubaron por dos días a temperatura ambiente.
La aparición de halos de inhibición alrededor del disco
indicó la actividad fúngica del extracto, los cuales se
verificaron tomando en cuenta el diámetro (mm) de los
mismos.
Los experimentos de análisis del efecto
antimicrobiano de los extractos, se realizaron por
triplicado para cada una de las partes botánicas
estudiadas. Para establecer los diferentes grados de
inhibición del crecimiento bacteriano, se consideraron
los rangos de los diámetros de inhibición, como los
sugieren Rios et al (2009), aplicados a los extractos de
las especies empleadas en este estudio, estableciéndose
posteriormente rangos de la actividad antimicrobial.
Actividad tóxica o letalidad contra Artemia
salina:
Este bioensayo es un indicador de la actividad
antitumoral de extractos vegetales y/o compuestos
químicos presentes en los mismos. Inicialmente, se
determinó que existe una correlación positiva entre la
mortalidad de las larvas de Artemia y la citotoxicidad
frente a las células cancerígenas. De este modo, es posible
detectar extractos con actividad citotóxica, utilizando el
ensayo de mortalidad de larvas, más que otros ensayos
antitumorales in vivo o in vitro que resultan más
tediosos y costosos (Pino y Lazo, 2010).
Se preparó una solución de 10 000 µg. ml
-1
del
extracto, en una mezcla H
2
O/DMSO según la solubilidad
de éste y, a partir de ésta, se prepararon soluciones de 1
000 - 0,01 µg. ml
-1
mediante diluciones sucesivas con agua
de mar bifiltrada, en viales que contenían 10 nauplios
de A. salina, eclosionados con 24 h de anticipación. Por
concentración, se realizaron tres réplicas y un control
con igual número de réplicas. La cuantificación de la
mortalidad de los nauplios se realizó pasadas las 24 y 48
h de haber montado dicho ensayo. Los datos obtenidos
se utilizaron para calcular la concentración letal media
de los extractos y fracciones ensayadas, mediante la
aplicación del software LC50 V2.5 diseñado para tal fin,
que considera los análisis estadísticos computarizados
(Probit, Binomial, Logit y Moving Average) con límites
de confianza de 95 % (Stephan, 1977; Meyer et al., 1982).
III. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Obtención de los extractos
Obtenidos todos los extractos metanólicos de las
hojas, tallo y flores del cedrón, se determinó la masa de
los diversos extractos, así como también, su porcentaje
de rendimiento. En la Tabla 1 se encuentran reflejados
todos estos resultados, tomando como referencia la masa
inicial de las partes botánicas de dicha especie vegetal y
la masa del extracto crudo de las mismas, los cuales se
usaron luego para realizar el tamizaje fitoquímico y
analizar el efecto antimicrobiano y letal contra Artemia
salina de dichos extractos.
En la Tabla 1 se observan los porcentajes de
rendimientos de extracción de hojas, tallos y flores secas,
pudiéndose notar que el extracto de las flores presentó
el rendimiento de extracción más alto con 11,81% y el
del tallo mostró el rendimiento más bajo con respecto a
todos los extractos obtenidos, porcentaje de extracción
D’Armas et al. Fitoquímica de Lippia citriodora K cultivada en Ecuador y su actividad biológica.
de 3,78%. Tomando en consideración que el disolvente
utilizado fue el metanol, se puede considerar que en
las flores y hojas se encuentra la mayor cantidad de
metabolitos secundarios (taninos, polifenoles, esteroles,
triterpenos, fenilpropanoides con polaridades de media
Análisis Fitoquímico
La Tabla 2 muestra los resultados obtenidos
en el tamizaje fitoquímico realizado a los extractos
metanólicos de las partes botánicas de L. citriodora.
En dicha tabla, se puede observar que todos los
extractos metanólicos analizados de las distintas
partes botánicas, mostraron la presencia de taninos,
polifenoles, esteroles insaturados y triterpenos
pentaciclicos. Adicionalmente, los extractos del tallo
y flores exhibieron la presencia de fenilpropanoides y
catequinas; sin embargo, los metabolitos cumarinas
y metilencetonas fueron detectados solamente en el
extracto de las flores, y glicósidos cardiotónicos y
quinonas en el extracto del tallo. Tanto las hojas como el
tallo, mostraron la presencia de saponinas, y las hojas y
las flores la presencia de alcaloides. En ningún extracto
analizado se detectaron flavonoides, a excepción de las
hojas.
Estos resultados están en concordancia con los
reportados por Argyropoulou et al (2010) quienes
mediante estudios histoquímicos determinaron la
a alta fundamentalmente, siendo las flores las más ricas
en metabolitos secundarios polares. Es posible entonces
que en el tallo se encuentren metabolitos de baja
polaridad o apolares. (Henao et al., 2009)
Tabla 1. Porcentajes de rendimiento de los extractos metanólicos de las partes botánicas de L. citriodora.
Tabla 2. Tamizaje fitoquímico de los extractos metanólicos de las partes
botánicas de L. citriodora.
Parte botánica
Masa (g)
Rendimiento
(%)
INICIAL
EXTRACTO
Hojas
12,00
0,8611
7,18
Flores
12,00
1,4173
11,81
Tallo
12,00
0,8316
3,78
composición de los metabolitos secundarios de las hojas
de cedrón como fenoles, alcaloides, terpenos, taninos y
flavonoides.
Al realizarse una comparación de la riqueza de
metabolitos secundarios del extracto metanólico de las
partes botánicas de L. citriodora, se puede argumentar
que tanto el tallo como las flores son portadoras de la
mayor cantidad de familias de metabolitos secundarios
en la planta, en relación a las demás partes botánicas,
debido a que se puede apreciar en la Tabla 2 un
%MPE (porcentaje de metabolitos presentes para cada
extracto de la especie) igual a 64,29% para ambas; sin
embargo, las hojas mostraron un 42,86% de metabolitos
secundarios. Además, se puede apreciar que todos
los extractos metanólicos (de hojas, tallo y flores)
exhibieron la presencia de un 100% de metabolitos
pertenecientes a las mismas familias químicas (%MPF):
taninos, polifenoles, esteroles insaturados y triterpenos
pentacíclicos, siendo estas las familias predominantes en
esta especie vegetal.
Partes botánicas de la planta
Familias de
metabolitos
secundarios
Hojas
Tallos
Flores
%MPF
Saponinas
+
+
-
66,67
Taninos
+
+
+
100
Polifenoles
+
+
+
100
Glicósidos cardiotónicos
-
+
-
33,33
Glicósidos cianogénicos
-
-
-
0
Alcaloides
+
-
+
66,67
Volumen 12, Número 29,
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En otro estudio realizado previamente por
Argyropoulou et al. (2007) sobre la composición
química de aceites esenciales de las hojas de cedrón
por GC–MS, encontrándose que los principales
constituyentes (66.3%) fueron los terpenos
geranial, neral y limoneno. El género Lippia, tiene
un gran valor farmacológico, contiene cantidades
apreciables de metabolitos algunos de los cuales
han mostrado tener actividades biológicas
valorables. Omollo et al. (2014) realizaron
tamizajes fitoquímicos sobre este género,
demostrando la presencia de varios compuestos
como triterpenoides, fenoles, flavonoides,
fenilpropanoides y esteroides.
Como se mencionó, los polifenoles resultaron
positivo en los extractos metanólicos de todas las
partes botánicas de la planta L. citriodora. Seham
et al. (2012) realizaron una investigación sobre
bioactividades y potencial medicinal de los extractos
acuosos y alcohólico de la misma especie cultivada
en Egypto, también como composición fenólica del
extracto más bioactivo. Ellos reportaron que los
compuestos fenólicos (principalmente flavonoides,
ácidos fenólicos y fenilpropanoides) detectados
eran los responsables de su actividad farmacológica,
tales como efectos analgésico, antiinflamatoria y
antioxidante.
Actividad antimicrobiana (sensibilidad
microbiana)
Los extractos metanólicos fueron probados
frente a E. coli, S. aureus y P. aeruginosa,
y mostraron inactividad contra estas cepas
bacterianas. Sin embargo, esto no implica que
Cumarinas
-
-
+
33,33
Metilencetonas
-
-
+
33,33
Flavonoides
+
-
-
33,33
Esteroles insaturados
+
+
+
100
Triterpenos pentaciclicos
+
+
+
100
Fenilpropanoides
-
+
+
66,67
Quinonas
-
+
-
33,33
Catequinas
-
+
+
66,67
%MPE
42,86
64,29
64,29
Continuación Tabla 2.
(+): Detectado; (-): No detectado; %MPF: porcentaje de extractos de las partes botánicas con metabolitos pertenecientes a la misma familia química; %MPE:
porcentaje de metabolitos presentes para cada extracto de la especie.
frente a otros microrganismos no puedan presentar
cierta actividad inhibitoria (Mora et al., 2008).
En la Tabla 3 se representan los resultados de la
sensibilidad microbiana de los extractos metanólicos
de las hojas, tallo y flores de L. citriodora frente
a cepas de las bacterias Staphylococcus aureus
(Gram-positiva), Escherichia coli (Gram negativa)
y Pseudomonas aeruginosa (Gram negativa) a
distintas concentraciones del extracto a ensayar,
cuyos halos de inhibición se expresan utilizando
la metodología de cruces y criterios expuestos para
extractos (Rios et al., 2009).
El extracto metanólico de todas las partes
botánicas de L. citriodora demostró una alta o
muy alta actividad antibacteriana contra E.coli, P.
aeruginosa y S. aureus, a excepción de los extractos
de las hojas y flores que exhibieron una actividad
antibacteriana moderada y baja respectivamente
contra E. coli y S. aureus, a una concentración del
20 mg. ml
-1
; sin embargo, la sensibilidad bacteriana
de ambas cepas se incrementó al ser expuestas a
soluciones de 40 mg. ml
-1
de ambos extractos.
A una concentración de 20 mg. ml
-1
, el extracto
del tallo fue el que la mayor actividad antibacteriana
contra todas las cepas ensayadas, al presentar halos
de inhibición superior a los 15 mm, seguido por los
extractos de las hojas y las flores. Se observó una
mayor efectividad de los extractos contra todas
las bacterias al duplicarse la concentración de
los mismos a 40 mg. ml
-1
. En general, se puede
inferir que tanto la cepa Gram positiva como las
Gram negativas mostraron una alta sensibilidad
bacteriana frente a los extractos metanólicos
D’Armas et al. Fitoquímica de Lippia citriodora K cultivada en Ecuador y su actividad biológica.
de todas las partes botánicas estudiadas de L.
citriodora, y con valores de halos de inhibición
muy cercanos a los de los patrones: antibiótico
Diámetros de los halos de inhibición: (-) <6
mm ninguna actividad antimicrobiana; (1+) 6-8
mm poca actividad antimicrobiana; (2+) 8-10 mm
mediana actividad antimicrobiana; (3+) 10-15 mm
alta actividad antimicrobiana; (4+) >15 mm muy
alta actividad antimicrobiana. a: media de valores
de tres réplicas de halos de inhibición, expresados
con metodología de cruces; b: antibiótico
(ciprofloxacino) o antifúngico de referencia
(cloranfenicol); EMH: extracto de metanol de
hojas; EMT: extracto de metanol de tallos; EMF:
extracto de metanol de flores de cedrón.
Los resultados encontrados en esta
investigación coinciden con los de Silva et al.
(2016), donde los investigadores encontraron que
los aceites esenciales de las hojas de L. thymoides
tenían selectividad antimicrobiana contra las
bacterias Gram-positivas Staphylococcus aureus y
Micrococcus luteus, y además establecieron la base
farmacológica para el uso tradicional de la misma
especie (Silva et al., 2015). Otro estudio realizado en
Bostwana, indica que la planta mostró propiedades
antimicrobianas, y que se usa tradicionalmente
para tratar el hongo Candida en las comunidades
africanas (Omollo et al., 2014).
Diversos estudios realizados sobre la
composición química y actividad biológica de las
hojas de L. citriodora han demostrado la presencia
de metabolitos bioactivos como los fenilpropanoides
y polifenoles a los cuales se le atribuyen las
(ciprofloxacino) y antifúngico de referencia
(cloranfenicol) ensayados.
Tabla 3. Actividad antimicrobianaa mostrada por extractos metanólicos de L. citriodora a distintas
concentraciones frente a las cepas utilizadas.
Microorganismos
Concentraciones del extracto (mg.ml-
1
)
20
40
EMH
EMT
EMF
Patrón
b
EMH
EMT
EMF
Patrón
b
Bacterias
S. aureus
3+
4+
1+
4+
4+
4+
4+
4+
E. coli
2+
4+
3+
4+
4+
4+
3+
4+
P. aeruginosa
3+
4+
3+
4+
4+
4+
3+
4+
Hongo
C. albicans
1+
2+
3+
4+
+2
3+
3+
4+
propiedades antioxidantes, antitumorales,
inmunosupresivas y antimicrobianas que posee
esta especie (Venkateswara et al., 2013; Herranz-
López et al., 2015).
Estudios reportados en la literatura,
demuestran que las bioactividades del extracto de
la planta L. citriodora se deben no a un solo tipo
de compuesto, ya que varias investigaciones han
mostrado interacciones entre compuestos fenólicos,
principalmente efectos sinérgicos y antagonistas.
A su vez, los investigadores aislaron flavonoides y
otros compuestos fenólicos de cedrón recolectada
en diferentes localidades (Skaltsa, 1988; Ono et al.,
2008).
Actividad tóxica o letalidad
La concentración letal media (CL
50
) es de
vital importancia para medir la letalidad, porque
proporciona una medida de cuan tóxica resulta
ser la especie vegetal L. citriodora, y si estas
propiedades pueden causar un efecto negativo en el
organismo, o por el contrario pueden usarse dichas
propiedades tóxicas en contra de patógenos, lo cual
se realiza por medio de larvas de experimentación
como la Artemia (Parra et al., 2001).
En la Tabla 4, se puede observar que el
porcentaje de mortalidad que ocasiona los extractos
de las hojas y el tallo, en las larvas de A. salina
es del 100% a la máxima concentración (1000
mg.ml
-1
); sin embargo, tan solo el extracto del
Volumen 12, Número 29,
Enero-Abril 2019
, pp. 09 - 19
Se puede apreciar en la Tabla 5 una
concentración letal media (CL
50
< 200 µg.ml
-1
) o
sea una letalidad o toxicidad significativa, según el
método Moving Average para los extractos de las
hojas y flores, y método Binomial para el extracto
del tallo, con valores más confiables de límites
de confianza del 95%, por lo que los extractos
podrían poseer compuestos bioactivos (Meyer
et al, 1982). Además, se observa que el extracto
metanólico del tallo mostró una toxicidad de 82,19
µg.ml
-1
en contra de las larvas ensayadas, a las 24
h, por lo que se puede inferir que todas las partes
botánicas de L. citriodora, y especialmente el tallo,
constituyen una fuente de compuestos bioactivos.
De acuerdo a las categorías de toxicidad del
Programa Iberoamericano de Ciencia y Tecnología
para el Desarrollo- CYTED (1995), tanto el extracto
de hojas como el de las flores son considerados
moderadamente tóxicos, y el del tallo altamente
IV. CONCLUSIONES
Todas la partes botánicas estudiadas de L.
citriodora exhibieron efecto antibacteriano y
antifúngico significativo contra las cepas de
bacterias Gram (+) y Gram (-), y hongo ensayado
(C. albicans).
tallo mata 60% de los nauplios ensayados a menor
concentración, lo que da indicio de su buena acción
tóxica. Se podría presumir que dicho extracto posee
una letalidad muy significativa, mostrando una
toxicidad indicativa de la presencia de compuestos
antitumorales de gran valor farmacológico en el
extracto (Pino y Lazo, 2010).
Tabla 4. Porcentaje de mortalidad (%) correspondiente al ensayo de Artemia salina en los diferentes extractos de
L. citriodora.
Tabla 5. Concentración letal media (µg.ml
-1
) contra A. salina, de los extractos de las partes botánicas de L.
citriodora
Extractos
Concentraciones de disoluciones del extracto (µg.ml-
1
)
1000
100
10
1
control
EMHC
100
23,3
10,0
6,7
3,3
EMTC
100
60,0
3,3
0,0
0,0
EMFC
86,6
42,9
13,3
7,1
3,3
EMH: Extracto metanólico de hojas; EMT: Extracto metanólico de tallo; EMF: Extracto metanólico de flores. Control: solución de dimetilsulfóxido (500µl) en 3,6ml
de agua de mar bifiltrada.
EMH: Extracto metanólico de hojas; EMT: Extracto metanólico de tallo; EMF: Extracto metanólico de flores. a: Límite de confianza del 95%. b: Programa
Iberoamericano de Ciencia y Tecnología para el Desarrollo (CYTED).
tóxico, y por ende el más promisorio como fuente
de metabolitos con posible actividad antitumoral.
Se puede inferir que probablemente, este
efecto letal o tóxico observado en los extractos
metanólicos de las distintas partes botánicas
de la planta, se deba a la presencia de algunas
familias de metabolitos detectados en los ensayos
químicos preliminares realizados, o a la acción
sinérgica de ellos (taninos, alcaloides, triterpenos,
esteroles, polifenoles, flavonoides, metilencetonas,
fenilpropanoides y/o cumarinas). Adicionalmente,
la actividad tóxica muy significativa o altamente
tóxica encontrada para el tallo, se podría atribuir a
la presencia de glicósidos cardiotónicos y quinonas,
metabolitos ausentes en las hojas y flores de L.
citriodora, o al efecto sinérgico de éstos con los
otros compuestos presentes en el tallo (Sepúlveda
et al. 2003; Avello y Cisternas, 2010).
Extractos
CL
50
(24 h)
Método
Intervalo
a
Categorías CYTED
b
de toxicidad
EMH
168,77
Moving Average
113,42-262,17
moderadamente tóxico
EMT
82,19
Binomial
10,00-100,00
altamente tóxico
EMF
172,76
Moving Average
93,27-355,78
moderadamente tóxico
Cedrón mostró actividad letal o tóxica
significativa, siendo el extracto metanólico del
tallo el considerado altamente tóxico, debido a que
presentó una concentración letal media inferior a
100 µg.ml-
1
.
D’Armas et al. Fitoquímica de Lippia citriodora K cultivada en Ecuador y su actividad biológica.
El análisis fitoquímico reveló la presencia de
compuestos químicos comunes para las hojas,
flores y tallo (taninos, polifenoles, triterpenos
y esteroles insaturados), por lo que dichas
familias de metabolitos detectados, podrían ser
responsables de la antibiosis observada para la
especie estudiada.
A partir de los resultados obtenidos, se puede
inferir que la planta L. citriodora es una fuente
promisoria de metabolitos secundarios bioactivos
con actividad farmacológica (antimicrobianos y
citotóxicos), lo que sugiere su importancia como
agente de uso terapéutico en Ecuador.
AGRADECIMIENTOS
Los autores expresan su agradecimiento al
Proyecto Prometeo de la Secretaría Nacional
de Educación Superior, Ciencia y Tecnología
de la República de Ecuador (SENESCYT) por el
financiamiento de esta investigación.
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