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González et al. Factores de crecimiento en plasma rico en plaquetas.
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Factores de crecimiento en plasma rico en plaquetas de individuos sanos
tratados con agentes anplaquetarios
Growth factors in platelet rich plasma of healthy parcipants treated
with anplatelet agents
Resumen
Las propiedades del plasma rico en plaquetas (PRP) son atribuidas especialmente a su alto nivel de factores de
crecimiento (FCs), la acción de los agentes anplaquetarios podría alterar la liberación de los FCs del PRP. Este estudio
evaluó los niveles del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF-BB), factor de crecimiento endotelial
vascular (VEGF-A) y factor de crecimiento epidérmico (EGF) en el PRP y plasma pobre en plaquetas (PPP) de 20
individuos sanos antes y después del tratamiento con agentes anplaquetarios. A los 20 individuos se les extrajo una
muestra de sangre venosa para la obtención del PPP y PRP mediante el método de centrifugación única de Anitua.
Los mismos 20 individuos se dividieron en dos grupos: 10 recibieron una dosis oral diaria Aspirina (100 mg) y 10 de
Clopidogrel (75 mg) por 7 días. Luego del tratamiento se repió el procedimiento de obtención del PRP y PPP. Se
midieron los niveles de los FCs en las muestras usando la técnica de ELISA. Al comparar los niveles pretratamiento
y postratamiento, hubo una disminución signicava en el grupo tratado con Aspirina en el PDGF-BB (PPP: <0,05) y
EGF (PPP: <0,05/ PRP: <0,04) y el grupo tratado con Clopidogrel en el PDGF-BB (PPP: <0,009/ PRP:<0,0001), VEGF-A
(PPP: <0,001/ PRP<0,01) y EGF (PPP: <0,04/ PRP<0,018). La disminución de los FCs después del tratamiento con
ambos agentes anplaquetarios, especialmente Clopidogrel, no permite asegurar que el efecto clínico de los FCs
plaquetarios pueda verse afectado sensiblemente por lo que se necesitan futuros estudios clínicos.
Palabras Clave: Aspirina; Clopidogrel; EGF; PRP; PDGF; VEGF.
Abstract
Properes of platelet rich plasma (PRP) were aributed specially of high levels of growth factors (GFs), acon of
anplatelet agents could alter the release of GFs from PRP. This study assessed the level of platelet-derived growth
factor (PDGF), vascular endothelial growth factor (VEGF), and epidermal growth factor (EGF) from PRP of 20 heal-
thy parcipants before and aer treatment with anplatelet agents. Venous blood samples were collected from
the 20 parcipants to obtain PPP and PRP by the single centrifugaon method of Anitua. The same 20 parcipants
were divided in two groups: 10 received a dairy oral dose of Aspirin (100 mg) and 10 of Clopidogrel (75 mg) for
7 days. The procedure to obtain PPP and PRP was repeated aer treatment. Levels of GFs were measured using
the technique of ELISA. When pretreatment and posreatment levels were compared, a signicant decrease was
found in the group treated with Aspirin in the PDGF-BB (PPP: <0,05) and EGF (PPP: <0,05/ PRP: <0,04) and group
treated with Clopidogrel in PDGF-BB (PPP: <0,009/ PRP:<0,0001), VEGF-A (PPP: <0,001/ PRP<0,01) and EGF (PPP:
<0,04/ PRP<0,018). Decreases in GFs aer treatment of each anplatelets agent, specially Clopidogrel, cannot
ensure that clinical eect of platelet GFs would be completely aected, future clinical studies are needed.
Keywords: Aspirin; Clopidogrel; EGF; PRP; PDGF; VEGF.
Maczy González-Rincón
1
; Gino Curiel
2
; Keiryth Barreto
2
; Ana Ruiz
3
;
Jesús Quintero
4
; María Patricia Sánchez
2
¸ Carem Prieto
5*
; Hermel Espinosa
6
;
Fabricio Guerrero
7
; Karla Aspiazu
8
(Recibido: febrero 03, Aceptado: mayo 20, 2022)
hps://doi.org/10.29076/issn.2602-8360vol6iss10.2022pp58-68p
1 Licenciada en Bioanálisis, Doctora en Ciencias de la Salud. Universidad del Zulia, Venezuela. Email: maczygonzalez@hotmail.
com. ORCID: hps://orcid.org/0000-0001-9343-6548
2 Lic. en Bioanálisis. Universidad del Zulia, Venezuela. ORCID: hps://orcid.org/0000-0001-8572-4451; ORCID: hps://orcid.
org/0000-0002-0743-400X; ORCID: hps://orcid.org/0000-0002-7290-5349
3 Licenciada en Bioanálisis, Doctora en Ciencias de la Salud. Universidad del Zulia, Venezuela. Email: ruizag2801@yahoo.es.
ORCID: hps://orcid.org/0000-0002-9500-8755
4 Doctor en Ciencias Médicas. Director del Instuto de Invesgaciones Clínicas “Dr. Américo Negree”. Universidad del Zulia,
Venezuela. Email: jequin@gmail.com. ORCID: hps://orcid.org/0000-0001-5677-8821
5 Licenciada en Bioanálisis, Doctora en Ciencias de la Salud, Invesgadora del Centro de Invesgaciones Endocrino-Metabólicas
Dr. Feliz Gómez, Universidad del Zulia, Venezuela. Universidad Católica de Cuenca, Ecuador. Email: carem.prieto@ucacue.edu.
ec. ORCID: hps://orcid.org/0000-0002-7752-932X
6 Especialista en Medicina Interna. Universidad Católica de Cuenca, Ecuador. Email: spinossa_2@hotmail.com. ORCID: hps://
orcid.org/0000-0003-4733-8722
7 PhD. Medicina e Invesgación Traslacional. Universidad Católica de Cuenca, Ecuador. Email: dr.fabricioguerrero@hotmail.com.
ORCID: hps://orcid.org/0000-0001-9909-3689
8 Máster en Invesgación médica clínica y experimental. Universidad Católica de Cuenca, Ecuador. Email: drakarlaaspiazu@
hotmail.com. ORCID: hps://orcid.org/0000-0002-6016-4109
* Autor de correspondencia
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González et al. Factores de crecimiento en plasma rico en plaquetas.
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INTRODUCCIÓN
La aplicación de preparados celulares como
el plasma rico en plaquetas (PRP) ha descrito
tener ulidad como una terapia coadyuvante
para contrarrestar los procesos celulares de
envejecimiento y regeneración sular lo que
ha conducido su uso en múlples ramas de
la biología, medicina, odontología, y ciencias
anes. Esto se debe principalmente al hecho de
que las plaquetas son una abundante fuente de
factores de crecimiento (FCs) y otras moléculas
de señalización que regulan respuestas
biológicas en procesos claves durante el proceso
de la reparación celular en respuesta al daño
sular y vascular (1) (2).
Las plaquetas conenen tres pos de gránulos
secretores: los gránulos α, gránulos densos, y
lisosomas. Estos gránulos secretan sustancias
importantes en la formación del tapón
plaquetario y el coagulo hemáco durante la
hemostasia, con la nalidad del cese del sangrado
y la regeneración sular del tejido dañado. Los
gránulos α son los más predominantes debido
a su mayor número (50 a 80 por plaqueta),
estos conenen en su interior una importante
candad de FCs (2) (3).
Los FCs en el PRP promueven cuatro acciones
principales en el medio donde son administrados
como la proliferación, migración, diferenciación
y angiogénesis (3). Su mecanismo de acción
inicia al unirse a receptores especícos en varios
pos de célula, esta unión acva una cascada
de señalización de segundos mensajeros que
conlleva a la expresión de una secuencia de
genes que regulan una función especíca (4).
Entre los factores de crecimiento plaquetarios
se encuentran el factor de crecimiento derivado
de plaquetas (PDGF), factor de crecimiento
endotelial vascular (VEGF), factor de crecimiento
epidérmico (EGF), Factor de crecimiento
transformante β (TGFβ) y el factor de crecimiento
broblásco (FGF) entre otros (1) (2) (5).
El PDGF posee 4 isoformas conocidas: PDGF-
AA, PDGF-BB, PDGF-AB. Es un promotor
de la quimiotaxis y mitosis de las células
mesenquimales y broblastos. Facilita la
formación del colágeno po I y la proliferación
de células adiposas y broblastos dérmicos.
Mediante un mecanismo indirecto de
quimiotaxis promueve a la formación de vasos
sanguíneos (angiogénesis) a través de los
macrófagos (1) (5).
Por su parte, el VEGF es un mediador angiogénico,
interviene durante las etapas embrionarias y
postnatal. Induce la angiogénesis a través de la
quimiotaxis de las células endoteliales e inhibe
su apoptosis, presenta 5 isoformas, la más
abundante en las plaquetas es la VEGF-A. Es
producido además por otras células como los
macrófagos, osteoblastos y células musculares
lisas en estado de hipoxia (1) (5).
El EGF actúa en la quimiotaxis, diferenciación
y proliferación de las células mesenquimales,
broblastos y las células epiteliales, osteoblastos,
células musculares lisas. Se le atribuye la
capacidad de esmular la proliferación
y diferenciación celular en procesos de
epitelización de la epidermis epitelio corneal,
pulmonar y tráquea, durante la reparación
sular (5).
El uso del PRP se ha extendido a través de
diversas ramas de la medicina, no solo por su
alta concentración de FCs, sino también por ser
un procedimiento mínimamente invasivo, fácil y
de bajo costo (1) (3.) Generalmente es obtenido
mediante centrifugación diferencial de la sangre
del propio paciente (autóloga). El PRP se dene
como una fracción plasmáca que posee una
concentración de plaquetas 2 a 5 veces superior
al número de plaquetas en sangre periférica
(5). Para que los FCs sean liberados al medio
extracelular, las plaquetas dependen de una
serie de procesos metabólicos intracelulares
y agonistas que promueven la acvación
plaquetaria con la consecuente secreción de
estos dichos factores (6).
En condiciones siológicas la acvación
plaquetaria inuye en el cese de sangrado y
reparación de los vasos sanguíneos lesionados,
pero la alteración de este proceso puede
conllevar a un estado patológico como la
trombosis, formando coágulos (trombos)
en vasos sanguíneos intactos. Los agentes
anplaquetarios como la Aspirina (Ácido
acel salicílico-AAS) y las enopiridinas
(Clopidogrel /Ticlopidinas) son fármacos
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González et al. Factores de crecimiento en plasma rico en plaquetas.
ulizados universalmente en el tratamiento
de pacientes con tendencia a formar trombos
por diversas causas de origen metabólico, así
como cardiopaas congénitas y/o adquiridas,
enfermedad cerebrovascular entre otras. Los
agentes anplaquetarios reducen el riesgo a
eventos cardiovasculares, sin embargo, sus
mecanismos de acción al inhibir la acvación
y agregación plaquetaria podrían interferir
en la secreción de los FCs y las propiedades
reconocidas del PRP (5) (7).
El AAS es un ácido inorgánico, ingerido vía
oral inhibe irreversiblemente la enzima
ciclooxigenasa 1 (COX-1) al inacvar el sio
acvo de la enzima mediante la adición de
un residuo acelo. La COX-1 es la encargada
de transformar el ácido araquidónico en
Tromboxano A2 (TXA2) que induce la secreción
de sustancias proagregantes como el difosfato
de adenosina (ADP) proveniente de los gránulos
densos plaquetarios, al ser inhibida es inhibida
la producción de TXA2 y. Dosis bajas de 30-325
mg por día del AAS vía oral producen su efecto
anagregante en la COX-1 (8) (9).
El Clopidogrel bajo dosis oral requiere la
oxidación de la isoforma CYP2C19 de la enzima
citocromo P450-1a del hígado para generar su
metabolito acvo el cual bloquea de manera
selecva e irreversiblemente al P2Y1 y P2Y12
que son receptores plaquetarios del difosfato
de ADP, de esta manera inhibe la agregación
plaquetaria. Con dosis repedas de 50 a 100 mg,
la inhibición de la agregación plaquetaria alcanza
su nivel máximo a los 3-7 días, en condiciones
siológicas en un 40-60% (8) (10).
En la actualidad existen pocos estudios, que
permitan realizar un consenso sobre el uso
del PRP en individuos tratados con agentes
anplaquetarios, la variabilidad de los hallazgos
preliminares aún no compensa lo suciente para
permir una comprensión profunda del efecto
farmacológico de los agentes anplaquetarios
como AAS y Clopidogrel en la secreción de los
FCs en el PRP, por lo que son necesarios más
invesgaciones que permitan contribuir en
estos aspectos considerando las propiedades y
ulidades de preparados plaquetarios como el
PRP (5) (11) (12).
El presente estudio ene como objevo medir
los niveles de los factores de crecimiento PDGF,
VEGF y EGF en el plasma rico en plaquetas y
plasma pobre en plaquetas (PPP) de individuos
sanos antes y después de 7 días bajo el
tratamiento con AAS y Clopidogrel, esto con
la nalidad de aportar al conocimiento de sí
el uso prolácco de dichos fármacos pudiera
modicar de manera importante los niveles de
estos FCs en el PRP.
METODOLOGÍA
Este es un estudio de po descripvo con un
diseño experimental de carácter longitudinal
(13) que tuvo lugar en la sección de Hematología
del Instuto de Invesgaciones Clínicas (IIC) “Dr.
Américo Negree” de la Facultad de Medicina
de la Universidad del Zulia (L.U.Z) en el periodo
comprendido desde enero de 2017 a octubre
de 2019. La población objeto de estudio estuvo
conformada por todos los adultos de ambos
sexos, aparentemente sanos que acudieron
al IIC “Dr. Américo Negree”. La población fue
de carácter nita, es decir, menos de cien mil
individuos. Para seleccionar a los parcipantes
de la muestra de estudio se ulizó la técnica
de muestreo no probabilísco intencional u
opináco (13).
Los parcipantes seleccionados fueron adultos
entre 18-50 años de sexo masculino y femenino
que desearon parcipar en el estudio, sin
enfermedades clínica de base conocida,
aparentemente sanos, en ayunas y con
resultados normales en el estudio de agregación
plaquetaria antes del tratamiento con el agente
anplaquetario respecvo y que acataron
de manera estricta el tratamiento indicado.
Fueron excluidos aquellos que habían ingerido
previamente agentes anplaquetarios y/o
consumido bebidas alcohólicas 11 días antes del
estudio o que estuvieran recibiendo cualquier
po de tratamiento o medicación.
Para disminuir el sesgo de la muestra la técnica
que se ulizó en el muestreo correspondió los 20
primeros parcipantes (13 del sexo femenino y
7 del sexo masculino) que cumplieron con todos
los criterios de selección. Todos los individuos
fueron somedos a un examen clínico y de
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González et al. Factores de crecimiento en plasma rico en plaquetas.
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laboratorio exhausvo, con el n de descartar
enfermedades sistémicas. Los parcipantes se
distribuyeron de la siguiente manera: el grupo A
(conformado por 20 individuos sin tratamiento
con agentes anplaquetarios, como grupo
control), estos mismos conformaron el grupo B,
el grupo B se dividió en dos subgrupos: B1 (10
individuos que recibieron una dosis diaria de 100
mg de AAS durante 7 días) y B2 (10 individuos
quienes recibieron una dosis diaria de 75 mg de
Clopidogrel durante 7 días).
A todos los individuos incluidos en este estudio
se les requirió un consenmiento informado
por escrito antes de ser incluidos en el estudio
y se les idencó a través de números; se
contó con la aprobación del Comité de éca
del IIC “Dr. Américo Negree” de la Facultad
de Medicina de L.U.Z. Se procedió de acuerdo
a los principios de la declaración de Helsinki
de 1975, actualizada en el 2013 (14), en la 64
Asamblea Médica Mundial General en Fortaleza,
Brasil, y las recomendaciones por el Consejo
de Organizaciones Internacionales de Ciencias
Médicas (CIOMS) en el 2002 (15).
A cada parcipante antes del tratamiento
(Grupo A: Control) en ayunas con previa asepsia
de la zona se le extrajeron 16 ml de sangre
venosa antecubital mediante la punción venosa
ulizando mariposas Nº 21 empleando la técnica
de la doble jeringa para evitar la acvación de
las plaquetas (16):
I. Los 2,5 de sangre de la primera jeringa se
dispensaron en tubos de vidrio con EDTA
para la hematología completa recogiendo
los datos concernientes a plaquetas y
glóbulos blancos, para lo cual se empleó
un contador automazado de células
sanguíneas (Beckman Coulter AC-T, USA);
considerándose valores normales para
plaquetas entre 150.000 y 450.000 x mm3
en sangre periférica (17).
II. Los 13,5 ml de sangre venosa de la
segunda jeringa, se distribuyeron en dos
tubos:
a. 4,5 ml se dispensaron en un tubo plásco
que contenía 0,5 ml de ancoagulante
citrato de sodio al 3,8% el cual se
centrifugo por 10 minutos a 800 rpm
(180G) a temperatura ambiente para
obtener PRP; luego el remanente de
cada muestra se centrifugo 20 minutos
a 4500 rpm (revoluciones por minuto)
en una centrifuga refrigerada (Sorvall)
para obtener PPP (plasma pobre en
plaquetas). Se ajustó la concentración de
las plaquetas del PRP a 250.000 x mm3
con el PPP para realizar la agregación
plaquetaria (solo antes del tratamiento
con los agentes anplaquetarios), se
procedió según el método turbidimétrico
de Born empleando un agregometro
Chrono-Log (Corp-Haverton, PA, USA)
(18). El resultado obtenido expresado
en % permió descartar anomalías en
las funciones plaquetarias que podrían
incidir a una disminución estadísca de
los FCs medidos a causa de un PRP con
plaquetas siológicamente anormales.
b. Los 9 ml restantes de sangre se colocaron
en otro tubo de plásco que contenía 1
ml de citrato de sodio al 3.8%. Luego de
20 minutos de reposo, la muestra fue
centrifugada por 7 minutos a 1400 rpm
(267 G), siguiendo la técnica del método
de única centrifugación de Anitua et
al (19), para la obtención del PRP. Del
volumen total del PRP obtenido se
extrajeron 0,5 ml que se someeron a una
segunda centrifugación por 10 minutos
a 3500 rpm con la nalidad de obtener
un verdadero PPP cuya concentración
de plaquetas fue determinada mediante
recuento automazado empleando el
contador automáco de células (Beckman
Coulter AC-T, USA), corroborando que el
producto plasmáco tuviera un conteo
de plaquetas inferior a 2.000 plaquetas
x mm3. Del PRP obtenido de la primera
centrifugación se tomó el resto con un
pipeteado meculoso y con una punta
disnta, hasta la zona por encima de
la fracción roja, representando el PRP;
el cual se ulizó para el recuento de
plaquetas (para conrmar la obtención de
un verdadero PRP) el resto del PRP al igual
que el PPP se distribuyeron en alícuotas en
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González et al. Factores de crecimiento en plasma rico en plaquetas.
tubos pláscos Eppendorf a -70 °C, en un
ultracongelador vercal (Forma Scienc
U95-18), lugar donde se conservaron
hasta el análisis correspondiente de cada
factor de crecimiento.
Posteriormente a cada sujeto se le instruyó
consumir la dosis correspondiente al agente
anplaquetario respecvo (el grupo B1: 100
mg de AAS; grupo B2: 75 mg de Clopidogrel)
durante 7 días en ayunas. Al cabo de los cuales
se realizó la extracción sanguínea de 16 ml de
sangre venosa antecubital en ayunas siguiendo
el procedimiento mencionado en los puntos
1 y 2 (a y b) mencionados anteriormente. Se
hizo un seguimiento de los parcipantes para
conrmar que cumplieran el consumo de los
agentes anplaquetarios indicados y que no
presentaran efectos adversos durante el periodo
del tratamiento.
Los niveles de PDGF, VEGF y EGF se midieron en las
muestras y estándares comerciales empleando
el método de ELISA indirecto ulizando un
equipo lector de ELISA Mulskan Ex (marca
Electron Corporaon, USA). Los kits comerciales
para la determinación del PDGF (PDGF-BB) y
EGF fueron suministrados por ABCAM (ABCAM
INC, 1 Kendall Square, Ste B2304 Cambridge MA
02139-1517 USA) con número de lote: GR92691-
1 para el PDGF y GR:110762-1 para el EGF. El kit
comercial para el VEGF-A fue suministrado por
Thermo Scienc Pierce Biotechnology, 3747 N.
Meridian Road, PO Box 117, Rockford IL61105,
USA) con número de lote: ME 177706. Todos los
ensayos fueron llevados a cabo de acuerdo a las
instrucciones del manufacturador (20–22).
Para la tabulación y análisis de los resultados se
empleó el soware estadísco SPSS versión 17
para Windows. Los datos se muestran en tablas
en valores absolutos y porcentuales, así como
media aritméca +/- 1 desviación estándar (DS)
y rango. Debido al tamaño de la población de
estudio que es menor a 30 individuos se ulizó
la prueba t de Student para datos pareados
con la nalidad de comparar las variables en el
estudio. El intervalo de conanza fue de 95%
con una signicancia de p <0,05 como la menor
probabilidad estadísca (23).
RESULTADOS
En la Tabla 1 se muestran los valores estadíscos
descripvos promedio, desviación estándar
y rango del recuento plaquetario en el PRP
de los individuos sanos antes y después del
tratamiento con AAS y Clopidogrel. Se evidenció
que los valores del recuento plaquetario no
presentaron una disminución estadíscamente
signicava (p >0,05) tanto para el grupo tratado
con AAS como el grupo de Clopidogrel con
respecto al grupo control (antes del tratamiento
anplaquetario).
Tabla 1. Recuento plaquetario en el PRP de individuos sanos antes y
después del tratamiento con AAS y Clopidogrel
PRP: Plasma rico en plaquetas, AAS: Ácido acetil salicílico, (n=): Número de individuos estudiados, p: significancia, NS: no significativo (p >0,05)
Promedio + Desviación Estándar (rango)
Plaquetas
103 x µL
AAS (n=10) Clopidogrel (n=10)
Antes Después p Antes Después p
PRP
(n=20)
486,5 ± 129,5
(355,0 – 718,0)
449,2 ± 85,51
(340,0 - 577,0) NS 565,2 ± DS 150,4
(379,0 – 784,0)
592,9 ± DS 203,4
(260,0 – 890,0) NS
En la Tabla 2 se muestra una comparación del
promedio de los niveles de los factores de
crecimiento PDGF-BB, VEGF-A y EGF en el PRP
y PPP de individuos sanos estudiados antes
(control) y después del tratamiento con AAS.
Los niveles de PDGF-BB presentaron solo una
disminución estadíscamente signicava en el
PPP (p <0,05), pero no en el PRP (p >0,05). Se
observó una ligera disminución del VEGF en el
PPP y un aumento en el PRP, pero, al comparar
los valores antes y después del tratamiento no
se observaron diferencias estadíscamente
signicavas para el PPP y PRP (p >0,05). Hubo
disminución signicava en los niveles del EGF
luego de recibir AAS tanto en el PPP (p <0,05)
como en el PRP (p <0,043).
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González et al. Factores de crecimiento en plasma rico en plaquetas.
│ 63
La Tabla 3 muestra una comparación del
promedio de los niveles de los factores de
crecimiento PDGF-BB, VEGF-A, EGF en el PPP
y PRP de los individuos sanos antes y después
del tratamiento con Clopidogrel. Se observó
una marcada y signicava disminución en los
niveles del PDGF-BB después del tratamiento
DISCUSIÓN
El concepto y descripción del PRP inició
en el campo de la hematología donde fue
ulizado inicialmente en el tratamiento de
la trombocitopenia, posteriormente su uso y
estudio en otros campos permió descubrir
sus propiedades promotoras de la regeneración
sular del PRP en la cual los FCs de crecimiento
enen un papel importante (1-3). Debido a la
falta de consenso respecto a la administración
del PRP en individuos que consumen agentes
anplaquetarios, los cuales podrían inuir en los
FCs contenidos en los gránulos α plaquetarios,
es necesario evaluar los efectos inducidos por
agentes anplaquetarios como AAS y Clopidogrel
sobre los FCs plaquetarios más estudiados como
con Clopidogrel tanto para el PPP (p <0,009) y
en el PRP (<0,001). El VEGF-A presentó niveles
signicavamente bajos en el PPP (p <0,001) y
PRP (p< 0,01) con respecto a su control, de igual
manera en el EGF cuyos niveles disminuyeron
signicavamente en el PPP (p <0,04) y el PRP
(p <0,018).
el PDGF, VEGF, y EGF (2) (4) (5).
Los resultados de los parcipantes antes del
consumo de los agentes anplaquetarios
reportaron un recuento promedio plaquetario en
sangre periférica de 258,6 + 54,46 x 103 x µL que
se encontró dentro de los rangos de referencia
(17). El conteo plaquetario en el PRP antes del
tratamiento representó un incremento de 1,88
a 1,98 cuando se comparó con el recuento en
sangre periférica, esto concuerda con las cifras
plaquetarias esperadas en el PRP del protocolo
de Anitua et al (19), y la denición emida en la
literatura cienca (1) (24).
Resultados similares con respecto al conteo
plaquetario del PRP fueron presentados en
un estudio publicado en la revista “Archivo
Tabla 2. Niveles de los factores de crecimiento en el PPP y PRP antes y después del tratamiento con AAS.
Tabla 3. Niveles de los factores de crecimiento en el PPP y PRP antes y
después del tratamiento con Clopidogrel.
PDGF-BB: Factor de crecimiento derivado de Plaquetas BB, VEGF-A: Factor de crecimiento endotelial vascular A, EGF: Factor de crecimiento epidérmico,
PPP: Plasma pobre en plaquetas, PRP: Plasma rico en plaquetas, (n=): Número de individuos estudiados, p: Significancia, NS: No significativo (p
<0,05) *Promedio + Desviación Estándar (rango), a: Diferente con respecto a su control (Antes) p <0,05, b: Diferente con respecto a su control (Antes)
(p <0,05), c: Diferente con respecto a su control (Antes) (p<0,043)
PDGFBB: Factor de crecimiento derivado de Plaquetas BB, VEGF: Factor de crecimiento endotelial vascular A, EGF: Factor de crecimiento epidérmico,
PPP: Plasma pobre en plaquetas, PRP: Plasma rico en plaquetas, (n=): Número de individuos estudiados, p: Significancia, NS: No significativo (p
<0,05),*Promedio + Desviación Estándar (rango), a: Diferente respecto a su control (Antes) (p <0,009), b: Diferente respecto a su control (Antes) (p
<0,0001), c: Diferente respecto a su control (p <0,001), d: Diferente respecto a su control (0,01), e: Diferente respecto a su control (Antes) (p <0,04),
f: Diferente respecto a su control (Antes): (p <0,018).
Factor de
Crecimiento
PPP (n=10) PRP (n=10)
Antes Después p Antes Después p
PDGF-BB (ng/mL) 1,95 + 0,65*
(1,74 - 2,04)
1,71 + 0,22 a
(1,20 -1,97) < 0,05 1,98 + 0,22
(1,50 – 2,32)
1,97+ 0,35
(1,72 -2,77) NS
VEGF-A(pg/ mL) 681,393 + 133,8
(596,9 - 994,9)
549,56 + 237,1
(360,2 -1111,5) NS 800,972 + 192,29
(506,0 – 1005,1)
916,57 + 383,9
(507,7 -1728,4) NS
EGF(pg/mL) 188,740 ± 21,81
(157,7 - 226,5)
150,980 ± 22,84 b
(122,8 – 194,5) < 0,05 181,980 ± 21,0
(155,4 - 212,9)
158,060 ± 16,13 c
(127,8 – 179,0) < 0,043
Factor de
Crecimiento
PPP (n=10) PRP (n=10)
Antes Después p Antes Después p
PDGF-BB (ng/mL) 2,02 + 0,21*
(1,83– 2,57)
1,81+0,16a
(1,69-1,93 < 0,009 2,28 + 160,87
(1,94 -2,82)
1,88 + 0,52b
(1,79 – 1,91) <0,0001
VEGF-A(pg/ mL) 692,313 + 78,28
(590,0 – 841,5)
448,708 + 130,7c
(349,91– 665, 52) < 0,001 856,942 + 160,87
(686,1 -1190,4)
650,76 + 107,29d
(452,8– 799,3) < 0,01
EGF(pg/mL) 234,970 ± 80,73
(139,6 - 372,7)
147,800 ±24,24e
(128,0 - 210,2) < 0,04 214,520 ±69,608
(142,8 - 359,6)
148,540 ±12,322f
(134,1 - 172,4) < 0,018
64 │
Volumen 6, Nº 10, junio - noviembre 2022, pp. 58-68
González et al. Factores de crecimiento en plasma rico en plaquetas.
Venezolano de Farmacología y Terapéuca”
(5), en el 2016 donde se hizo el recuento
plaquetario en el PRP a los 32 sujetos sanos que
parciparon en esa invesgación, el método
de obtención fue igualmente a través del
protocolo de centrifugación única de Anitua.
En el 2017, Fitzpatrick et al (25), reportaron
cifras plaquetarias similares en el PRP de sujetos
sanos obtenido mediante el kit comercial ACP,
los cuales compararon las cifras plaquetarias
en el PRP obtenido por varios kits comerciales
de separación celular, otros kits reportaron
recuentos superiores lo cual podría deberse a
un mayor empo de centrifugación.
Después de 7 días del tratamiento con AAS y
Clopidogrel, no se observó una disminución
estadíscamente signicava en el recuento
plaquetario al compararlo con el del PRP antes
del tratamiento (basal) (Tabla 1). Estos datos
indican que las dosis suministradas de AAS y
Clopidogrel no afectaron signicavamente el
número de plaquetas en el PRP de los individuos
sanos. Este hallazgo coincide con el publicado
por González et al (5), los cuales no observaron
una disminución signicava en el recuento
plaquetario del PRP de 32 sujetos sanos 24
horas después de ingerir una dosis única de AAS
y Clopidogrel. Asumieron que el efecto de los
agentes anplaquetarios en una dosis única no
parecía afectar el recuento plaquetario lo que
podía deberse a que el recambio plaquetario es
entre 7 a 10 días.
A diferencia de González et al (5), en el
presente estudio se determinó el recuento
plaquetario bajo un tratamiento de 7 días
(periodo aproximado de la vida plaquetaria),
la no signicancia estadísca observada podría
atribuirse principalmente a que el principal
efecto de los agentes anplaquetarios es sobre la
función plaquetaria, no el número de plaquetas.
En cuanto al aumento o disminución no
signicava observada en el conteo plaquetario
después del tratamiento con los agentes
anplaquetarios en el PRP postratamiento en
comparación al PRP basal de ambos grupos, y
entre ellos, esto puede deberse a variaciones
siológicas del número de las plaquetas entre los
individuos sanos evaluados en este estudio. Cada
individuo ene una tasa de producción celular y
síntesis de FCs de acuerdo a las necesidades y
estado de su organismo con la nalidad de una
respuesta biológica apropiada en condiciones
siológicas (1) (5) (17), es importante acotar que
los individuos de este trabajo fueron somedos
a la misma evaluación clínica para conrmar su
estado de salud.
Al comparar los niveles de los FCs en el PRP y
PPP antes y después de 7 días del tratamiento
con AAS se observó una disminución del PDGF-
BB y EGF después del tratamiento. El EGF reveló
niveles signicavamente bajos en ambos
subproductos plaquetarios (PRP y PPP) mientras
que el PDGF-BB solo en el PPP, por lo que el AAS
pareció inuir en la secreción de estos factores,
en especial en el EGF. En cambio, el VEGF-A no
reveló una disminución signicava en el PPP ni
PRP.
González et al (5) que incluyeron la
determinación de los niveles de los FCs en el
PRP en sujetos sanos (entre 18-50 años) antes
y después del consumo de una dosis única
con AAS y Clopidogrel, después de 24 horas
de haber ingerido el AAS reportaron solo una
disminución del PDGF-BB en el PPP, pero no en
el PRP. En cambio, los niveles del EGF y VEGF-A
presentaron aumentos no signicavos, lo cual
podría deberse a uctuaciones siológicas o un
menor efecto del mecanismo propio del fármaco
bajo dosis única ya que a diferencia del estudio
aquí realizado donde se evaluó el efecto del AAS
después de 7 días sí se observó una disminución
signicava en los niveles del EGF, más no del
VEGF-A lo cual es un resultado coincidente con
González et al (5) respecto a este factor.
En el 2018, Tian et al (12), midieron los efectos de
ciertos factores como la edad, diabetes mellitus
y el consumo de agentes anplaquetarios
sobre los FCs en el PRP acvado con trombina
y gluconato de calcio, con respecto al grupo
formado por 10 pacientes (>45 años) con
enfermedades cardiacas que consumieron
AAS y/o Clopidogrel durante más de 3 meses
se observó una disminución del PDGF-AB, EGF
y VEGF-A en comparación al grupo control
(pacientes sanos, menores de 45 años, sin
medicación), la cual solo presentó diferencias
Volumen 6, Nº 10, junio - noviembre 2022, pp. 58-68
González et al. Factores de crecimiento en plasma rico en plaquetas.
│ 65
signicava para el PDGF-AB entre ambos
grupos.
En contraste, Anitua et al (26), no encontró
diferencias signicavas en los niveles del
PDGF-AB y VEGF en el PRP acvado con cloruro
de calcio (CaCl2) de 3 pacientes (entre 55-85
años) que consumieron AAS durante al menos
un año en comparación a pacientes sanos sin
medicación. Es importante resaltar que Anitua
et al (26) y Tian et al (12) ulizaron acvadores
plaquetarios en el PRP que pudieron inuir en el
proceso de secreción de los FCs en los individuos
tratados con AAS. La Trombina y CaCl2 podrían
acvar mecanismos alternos a la acvación
plaquetaria los cuales no dependen del TXA2
proveniente de la COX-1 plaquetaria. Con
respecto a la trombina, esta acvación podría ser
mediada por receptores como el PAR-1 acoplado
a proteína G que mediante la fosforilación de
proteínas intracelulares parciparían en la
acvación de manera alterna (6) (27). En años
recientes se ha postulado que el calcio (Ca+2) en
elevadas concentraciones extracelulares podría
inltrarse intracelularmente y acvar una serie
de eventos celulares que en conjunto con el
Ca+2 intracelular podrían inuir en la acvación
y secreción de los gránulos plaquetarios (6) (26)
(28).
Esto podría explicar la razón por la cual la
secreción de los FCs en el PRP acvado con
Trombina y/o CaCl2 no se vio afectada en su
totalidad en los individuos que consumieron AAS
(27,28), a diferencia de la presente invesgación
donde no se ulizó ninguna sustancia acvadora
en el PRP. Debe considerarse que otras células
como los monocitos y macrófagos son fuentes
no plaquetarias de TXA2 que pudieran inuir
también en el proceso de acvación (6) (26-28).
En relación a la liberación del VEGF-A, cuyo
comportamiento reportado por los autores
anteriormente mencionados, (5) (12) (26) no
presentó disminución signicava, parece
conrmar que el AAS podría no incidir en el
proceso de secreción del VEGF-A, sin embargo,
factores como el protocolo de centrifugación,
cinéca de la liberación del FCs, y la presencia
de células secretoras de este FCs en el PRP como
los leucocitos podrían inuir en su patrón de
secreción. (1) (5) (29).
Es importante destacar que existen pocos
estudios donde se evalué el efecto de agentes
anplaquetarios como el AAS en los niveles
del EGF, aspecto que diculta contrastar los
hallazgos de este estudio el cual mostró una
tendencia diferente para invesgadores como
González et al (5) y Tian et al (12). Se requieren
estudios más profundos que permitan
comprender la interacción del consumo de
AAS, así como los mecanismos celulares de
señalización implicados en la secreción de los FC
plaquetarios.
En el grupo tratado con Clopidogrel, los niveles
de los tres FCs presentaron una disminución
signicava tanto en el PPP como el PRP con
respecto a los valores obtenidos previo al
consumo de dicho fármaco. Al comparar los
hallazgos obtenidos con los resultados del grupo
tratado con AAS (Tabla 2) se nota un marcado
y signicavo descenso de los FCs en ambos
subproductos plaquetarios (PPP y PRP) por
lo que el Clopidogrel parece haber tenido un
mayor nivel de afectación en los niveles de los
FCs que el AAS.
Con respecto al PDGF-BB los hallazgos
concuerdan por los reportados por González et al
(5) donde los individuos sanos que consumieron
una dosis única de Clopidogrel, al medir sus
niveles 24 horas después presentaron una
disminución signicava del PDGF-BB en el PPP
y PRP con respecto a los valores pretratamiento.
Sin embargo, no se encontraron alteraciones
signicavas en los niveles de VEGF y EGF
postratamiento. Por otro lado, una publicación
en la revista “Journal of Denst” (11), reportó
una disminución del PDGF-BB y VEGF en el
PRP y PPP de individuos sanos posterior a 24
horas del tratamiento con una dosis única de
Clopidogrel, estos atribuyeron dicho fenómeno
al mecanismo farmacológico que podría haber
incidido en el patrón de secreción.
Smith et al (30) midieron el PDGF-BB y TGF- β
en el PRP acvado con trombina calcicada en
pacientes que consumieron AAS y Clopidogrel
en un periodo menor de 5 días previo a un
procedimiento operatorio cardiovascular, los
parcipantes no reportaron una disminución
66 │
Volumen 6, Nº 10, junio - noviembre 2022, pp. 58-68
González et al. Factores de crecimiento en plasma rico en plaquetas.
del PDGF-BB en comparación con el grupo
de pacientes sin medicación anplaquetaria
conocida pero sí una ligera disminución no
signicava del TGF- β. Resultados diferentes a
los publicados por Tian et al (12) que sí revelaron
una disminución en el PDGF-AB, VEGF, y EGF la
cual solo fue signicava en el PDGF-AB en el
PRP de parcipantes que consumieron AAS y/o
Clopidogrel por más de 3 meses, su disminución
podría deberse a la terapia combinada que pudo
generar una interacción de ambos fármacos
aunado al empo más prolongado.
El Clopidogrel bloquea los receptores P2Y1
y P2Y12 para el ADP que actúan de modo
sinérgico en la acvación plaquetaria, el P2Y1
en la acvación inicial irreversible y el P2Y12 en
la acvación prolongada a través de una serie
de mecanismos de señalización conjunto con
otros ligandos inuyen en la secreción de Ca+2
intracelular al medio exterior y la liberación
de los gránulos plaquetarios (6,7). Además,
este fármaco interere con los receptores del
brinógeno (complejo glicoproteíco GIIbIIIa) el
cual se encuentra en un 30% de la membrana
externa de los gránulos α (26), estos receptores
moleculares se orientan al lado externo durante
el proceso de acvación, por lo que el Clopidogrel
podría amplicar su inhibición a otras vías de la
agregación plaquetaria que pudieran alterar la
secreción de los FCs.
CONCLUSIONES
Este estudio mostró una marcada disminución
de los FCs en el PRP de los individuos tratados
con Clopidogrel, se reveló un menor grado de
afectación después del tratamiento con AAS. No
se debe caer en el falso entendimiento de que
los agentes anplaquetarios puedan afectar las
propiedades del PRP, sin embargo, es necesario
evaluar la respuesta de la terapia del PRP en los
individuos que consuman dichos fármacos.
Se debe tomar en cuenta que la falta de
estandarización entre los diferentes kits
comerciales para la medición de los FCs, décit
en material referencial sobre la preparación del
PRP y guías procedimentales validadas a nivel
internacional o por organizaciones médicas
ociales, hacen dicil la comparación de estos
resultados con los reportados en la literatura
cienca. Es importante resaltar que no existen
valores referenciales ni rangos terapéucos
de los factores de crecimiento, la información
de los mecanismos de señalización celular
implicados en la liberación de los FCs o sí los
agentes anplaquetarios podrían intervenir e
incidir fases especícas en estas rutas no han
sido descritas en su totalidad.
Son necesarios estudios futuros con mayor
un número de individuos y un diseño que
permita contribuir a la comprensión de los
mecanismos de señalización implicados en
las propiedades regeneravas del PRP y sí
fármacos como AAS y Clopidogrel podrían
inuir en los mismos. Así como más ensayos
clínicos controlados aleatorizados que permitan
validar las indicaciones clínicas de los FCs
conduciendo así al establecimiento de rangos
terapéucos y de referencia de acuerdo a cada
campo de aplicación, todo esto con la nalidad
de opmizar la terapéuca mediante el PRP
para garanzar una mejoría comprobada en la
condición médica en la cual sea aplicado.
Este estudio fue nanciado por el FONACIT
(Fondo Nacional para la Ciencia y Tecnología)
quien suministró los materiales y kits necesarios
para su realización. Se contó con la colaboración
del Instuto de Invesgaciones Clínicas “Dr.
Américo Negree” de la Facultad de Medicina
de la Universidad del Zulia (LUZ) en cuyos
laboratorios se llevó a cabo el análisis de las
muestras recolectadas. Agradecimiento especial
al Dr. Jesús Quintero por sus aportes en el
análisis estadísco de los resultados.
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