Vélez et al. Metabolitos secundarios, actividad antimicrobiana y letalidad pp. 31-39
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Metabolitos secundarios, actividad antimicrobiana y letalidad de las
hojas de Cymbopogon citratus (hierba luisa) y Melissa ofcinalis (toronjil)
Secondary metabolites, antibacterial activity and lethality of Cymbopogon
citratus (lemon verbena) and Melissa ofcinalis (lemon balm)
Resumen
Los ejemplares de las especies vegetales Cymbopogon citratus (hierba luisa) y Melissa ofcinalis (toronjil), se recolectaron al azar
en la localidad de Machala, Ecuador. Las hojas fueron lavadas, secadas, molidas y extraídas por maceración con metanol; los ltra-
dos concentrados por evaporación a presión reducida. A cada extracto, se le realizaron pruebas toquímicas y ensayos biológicos
como: actividad antimicrobiana (antibiograma: difusión en agar) y letalidad con Artemia salina. Los extractos de C. citratus y M.
ofcinalis revelaron la presencia de esteroles insaturados, triterpenos pentacíclicos, fenilpropanoides y catequinas. Mientras que en
el de M. ofcinalis se detectaron, además, cumarinas y metilencetonas. Los extractos de ambas especies (soluciones de 20 y 40
mg/L) mostraron actividad antibacteriana contra las cepas Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus, a
excepción de los extractos metanólicos de M. ofcinalis (20 mg/L) y C. citratus (40 mg/L) que no exhibieron actividad frente a E. coli.
La especie C. citratus mostró el mayor efecto antibacteriano contra las bacterias P. aeruginosa y S. aureus (halos de inhibición >
15mm). Se observó una actividad antifúngica alta del extracto de C. citratus, y una actividad moderada del extracto de M. ofcinalis,
contra la cepa del hongo Candida albicans. C. citratus y M. ofcinalis mostraron una actividad letal signicativa (CL50 <1000 µg/ml)
frente a nauplios de A. salina a las 24 h de exposición: 358,03 y 72,25 µg/ml respectivamente. La especie M. ofcinalis presentó la
mayor letalidad, considerado altamente tóxico según CYTED. A partir de los resultados obtenidos, se puede inferir que las plantas
C. citratus y M. ofcinalis cultivadas en Ecuador son una fuente promisoria de metabolitos secundarios bioactivos con actividad
farmacológica (antimicrobianos y citotóxicos).
Palabras Clave: actividad tóxica; actividad antimicrobiana; toquímica; Artemia salina; Cymbopogon citratus; Melissa ofcinalis
Abstract
The specimens of the plant species Cymbopogon citratus (lemon-grass) and Melissa ofcinalis (lemon-balm), were collected at
random in the town of Machala, Ecuador. The leaves were washed, dried, ground and extracted by maceration with methanol;
the ltrates concentrated by evaporation at reduced pressure. Each extract was subjected to phytochemical tests and biological
tests such as: antimicrobial activity (antibiogram: agar diffusion) and lethality with Artemia salina. Extracts of C. citratus and M.
ofcinalis revealed the presence of unsaturated sterols, pentacyclic triterpenes, phenylpropanoids and catechins. While in M.
ofcinalis were detected, in addition, coumarins and methylene ketones. The extracts of both species (solutions of 20 and 40 mg
/ L) showed antibacterial activity against the strains Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus, with
the exception of the methanolic extracts of M. ofcinalis (20 mg / L) and C. citratus (40 mg / L) that did not exhibit activity against
E. coli. The species C. citratus showed the greatest antibacterial effect against the bacteria P. aeruginosa and S. aureus (halos of
inhibition> 15mm). A high antifungal activity of the extract of C. citratus was observed, and a moderate activity of the extract of M.
ofcinalis, against the strain of the fungus Candida albicans. C. citratus and M. ofcinalis showed signicant lethal activity (LC50
<1000 μg / ml) against A. salina nauplii at 24 h exposure: 358.03 and 72.25 μg / ml respectively. The species M. ofcinalis had
the highest lethality, considered highly toxic according to CYTED. From the results obtained, it can be inferred that the plants C.
citratus and M. ofcinalis cultivated in Ecuador are a promising source of bioactive secondary metabolites with pharmacological
activity (antimicrobial and cytotoxic).
Keywords: toxic activity; antimicrobial activity; Artemia salina; Cymbopogon citratus; phytochemistry; Melissa ofcinalis.
Ruth,Vélez
1
; Haydelba, D’Armas
2,3*
;Carmita, Jaramillo-Jaramillo
1
; Elington, Vélez
1
(Recibido: Diciembre - 2017, Aceptado: Abril - 2018)
1
Facultad de Ciencias Químicas y de la Salud, Universidad Técnica de Machala, UTMACH, Machala, Ecuador
2
Facultad de Ciencias de la Ingeniería, Universidad Estatal de Milagro, Milagro, Ecuador; 3Laboratorio de Productos
Naturales y Lípidos, Escuela de Ciencias, Universidad de Oriente, Cumana, Sucre, Venezuela.
E-mails: hdarmasr@unemi.edu.ec; htrinidad86@hotmail.com
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INTRODUCCIÓN
Hasta el siglo XVIII se conocían las propiedades
curativas de las plantas, su efecto sobre el organismo
y su modo de aplicación, pero se desconocían sus
principios activos. Con el desarrollo de las teorías de la
evolución y herencia genética, el uso del microscopio
y el nacimiento de ciencias como la toquímica y de
técnicas como el análisis instrumental, fue posible
el reconocimiento y el aislamiento de los principios
activos de muchas plantas medicinales (1).
Se han utilizado diversas técnicas microbiológicas
para demostrar la actividad antimicrobiana de plantas
frente a microorganismos patógenos para el hombre.
Entre ellas la utilización de extractos. El extracto de
plantas es una mezcla compleja, con multitud de
compuestos químicos, obtenible por procesos físicos
y/o químicos a partir de una fuente natural y utilizable
en cualquier campo de la tecnología; en general,
los extractos son soluciones diluidas de metabolitos
secundarios (2).
El aumento de la conanza en el uso de plantas
medicinales y productos derivados se ve reejado
por su empleo mayoritario tanto en países en vías de
desarrollo (80%), como en los países desarrollados
(50-60%). Esta realidad se puede potenciar aún
más en un país como Ecuador, poseedor de una
enorme biodiversidad y de un importante bagaje
de conocimientos ancestrales sobre el empleo de
plantas como alternativa curativa (3).
Ecuador cuenta con centenares de plantas
aromáticas y medicinales. Por lo tanto, en el país
el uso de plantas medicinales está inmerso en la
cotidianidad de sus habitantes. La medicina popular
se practica principalmente por habitantes de zonas
rurales, pero también por citadinos de toda clase
social. Se pueden encontrar gran variedad de plantas
con usos medicinales que se expenden en mercados
de la Sierra, Costa y Amazonía (4).
En las comunidades rurales de Ecuador, se usa
ampliamente un sin número de plantas medicinales,
sin que todas estas tengan un estudio cientíco de
sus propiedades, estas prácticas se basan solamente
en el conocimiento empírico y en la experiencia
de los pueblos. Tal es el caso de hierba luisa
(Cymbopogon citratus) y toronjil (Melissa ofcinalis),
que son usadas por la población rural con la creencia
de que posee grandes propiedades medicinales
para aliviar diferentes afecciones, siendo utilizada
como calmante, antiinamatorio, contra el dolor de
estómago y afecciones cutáneas en general (5).
La mayoría de las especies del género Cymbopogon
(Poaceae) han sido ampliamente usadas para
el tratamiento de enfermedades, de los nervios
y gastrointestinales; también se utilizan como
antiespasmódicos, analgésicos, antiinamatorios,
antipiréticos, diuréticos y sedativos (6). A su vez, las
plantas del género Melissa (Lamiaceae) son muy
utilizadas en diversas preparaciones aromáticas
por sus propiedades carminativas y sedantes, como
estimulante digestivo y son indicadas en el tratamiento
de espasmos gastrointestinales; sus hojas también
presentan actividad antibacteriana y antiviral (7.)
Este trabajo de investigación se enfocó en un análisis
de las hojas de hierba luisa (Cymbopogon citratus)
y toronjil (Melissa ofcinalis), con el propósito de
determinar las familias de compuestos químicos
(metabolitos secundarios que brindan la acción
terapéutica o toxica) y su acción farmacológica
(actividad antimicrobiana y letalidad contra A. salina).
Este estudio brinda un amplio conocimiento sobre la
composición química y el porqué de las propiedades
medicinales de dichas plantas a la población que
emplea estas especies, de tal manera que se pueda
emplear como principios activos en la elaboración de
tofármacos.
DESARROLLO
Metodología
Recolección de las muestras.
Los ejemplares de la especie vegetal Cymbopogon
citratus (hierba luisa) y Melissa ofcinalis (toronjil)
fueron recolectados en la ciudad de Machala
(Provincia del Oro: 65-85 % de humedad relativa y
temperatura promedio de 26 °C), Ecuador. Según
su calidad organoléptica, se seleccionaron las
hojas sanas para realización de los análisis, siendo
procesados en el laboratorio, sin almacenamiento
previo. La identicación de la especie fue realizada
por el Botánico Jesús Inca del Herbario de Quito,
Ecuador.
Obtención de los extractos.
Las hojas de cada planta se lavaron con agua
destilada y fueron secadas a temperatura ambiente
por 24 horas y posteriormente en una estufa
(Memmert SNB 400 con flujo de aire) a 40 °C por
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24 horas. Luego, se pulverizaron con un molino
(Lab. Mill serial No. 56969, Type AR 400 Erweka®,
Germany) y se pesaron. Los extractos se obtuvieron
por maceración del polvo de las hojas con metanol
100% puro por 72 horas. Los extractos fluidos se
filtraron y el residuo se re-extrajo con metanol por
48h; los filtrados combinados fueron concentrados
a presión reducida (aprox. 11 mbar) y 40 ºC en
un rotaevaporador marca Hidolph, obteniéndose el
extracto metanólico crudo para cada especie. Se
determinó la masa de cada uno de los extractos
de ambas plantas.
Análisis Fitoquímico.
Para detectar las familias de compuestos
presentes en los extractos de las esponjas se
llevaron a cabo pruebas químicas específicas, las
cuales permitieron apreciar la posible presencia
o ausencia de cumarinas y fenilpropanoides (8);
alcaloides, saponinas, glicósidos cardiotónicos,
glicósidos cianogénicos, esteroles insaturados y
triterpenos pentacíclicos, taninos y polifenoles,
antraquinonas y metilencetonas, siguiendo la
metodología de (9).
Actividad antibacteriana.
Se utilizó la técnica de difusión en agar, según
la metodología descrita por Bauer et al. (10),
empleándose cepas de bacterias certificadas:
una Gram positiva (Staphylococcus aureus) y dos
Gram negativas (Escherichia coli y Pseudomonas
aeruginosa), pertenecientes a la Colección
Americana de Cultivos Tipo (ATCC). La misma
consistió en impregnar discos estériles de papel
de ltro Whatman Nº 3 de 6 mm de diámetro con
10 µl de una solución preparada (20 y 40 mg/ml)
del extracto a analizar. Estos discos se colocaron
dentro de cajas de Petri que contenían agar
Mueller-Hinton, inoculadas con una suspensión
bacteriana de concentración conocida (1x108
bacterias/ml), preparada por comparación con un
patrón comercial estándar Nº 0,5 de McFarland.
Posteriormente, las cajas se preincubaron a 5ºC
durante 12 horas, para permitir la difusión del
extracto, y luego, se incubaron a 37ºC durante
48 horas, para permitir el crecimiento bacteriano.
Las zonas claras que se formaron alrededor de
los discos, se consideraron halos de inhibición, los
cuales fueron medidos, registrando para cada caso
el diámetro en milímetros de los halos de inhibición
del crecimiento bacteriano.
Actividad antifúngica.
Se siguió la técnica descrita por Madubunyi (11),
utilizando cepas de un hongo patógeno (Candida
albicans) de origen clínico. Dicha cepa se incubó
por un periodo de 5 a 7 días a temperatura ambiente
en un tubo con Agar Papa Dextrosa (PDA). Al cabo
de este tiempo, se añadió 10 ml de agua destilada
estéril al tubo, se agitó vigorosamente y se ltró a
través de un embudo con gasa previamente estéril,
para así obtener una suspensión de esporas. La
cepa de C. albicans se trató siguiendo la metodología
de la comparación con un estándar de turbidez
0,5 McFarland. La solución espongorial obtenida
se colocó sobre cápsulas de Petri, previamente
preparadas con PDA, empleando hisopos estériles.
Posteriormente, se colocaron los discos de papel
Whatman Nº 3 de 6 mm de diámetro impregnados
previamente con el extracto, y luego, se incubaron
por dos días a temperatura ambiente. La aparición
de halos de inhibición alrededor del disco indicó
la actividad fúngica del extracto, los cuales se
vericaron tomando en cuenta el diámetro (mm) de
los mismos.
Actividad tóxica o letal contra Artemia salina.
Se preparó una solución de 10 000 µg/ml del
extracto, en una mezcla H2O/DMSO según la
solubilidad de éste y, a partir de ésta, se prepararon
soluciones de 1 000 - 0,01 µg/ml mediante
diluciones sucesivas con agua de mar biltrada,
en viales que contenían 10 nauplios de A. salina,
eclosionados con 24 horas de anticipación. Por
cada concentración, se realizaron tres réplicas
y un control con igual número de réplicas. La
cuanticación de la mortalidad de los nauplios se
llevó a cabo pasadas las 24 y 48 horas de haber
montado dicho ensayo. Los datos obtenidos se
utilizaron para calcular la concentración letal media
de los extractos y fracciones ensayadas, mediante
la aplicación del software LC50 V2.5 diseñado
para tal n, que considera los análisis estadísticos
computarizados (Probit, Binomial, Logit y Moving
Average) con límites de conanza de 95 % (12, 13).
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RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Obtención de extractos.
Obtenidos todos los extractos metanólicos de las
hojas de Cymbopogon citratus (hierba luisa) y
Melissa officinalis (toronjil), se determinó la masa
de los diversos extractos, así como también, su
porcentaje de rendimiento. Se pudo observar un
rendimiento mayor para la especie M. officinalis
(5,95%) y menor para C. citratus (3,92%), estos
valores dependen de distintos factores como las
condiciones agronómicas del suelo, las malezas
presentes que compiten por nutrientes con la
planta, el momento en el que se cosechan y las
partes usadas para la extracción, de acuerdo a la
Organización Mundial de la Salud (14).
Análisis Fitoquímico.
Se realizaron las pruebas químicas para
determinar la posible presencia de familias de
Mediante un estudio farmacológico y tamizaje
químico realizado a un extracto hidroalcohólico de
C. citratus, se corroboró la presencia de compuestos
reductores, alcaloides, taninos, flavonoides y
triterpenos (15). En otra investigación realizada
a extractos alcohólicos y aceites esenciales de
especies del género Melissa, se identificaron
metabolitos secundarios en los extractos de las
hojas de las especies en estudio. Como puede
observarse en la Tabla 1, el extracto de C. citratus
es más rico en metabolitos secundarios que el
extracto de M. officinalis, contiene un 46,15 % de
familias de compuestos, siendo éstos: cumarinas,
metilencetonas, esteroles insaturados, triterpenos,
fenilpropanoides y catequinas; a diferencia
del extracto metanólico de M. officinalis que
contiene un 30,77 % de metabolitos y mostró la
presencias de los mismos compuestos químicos
que C. citratus, excepto la ausencia de cumarinas
y metilencetonas. En ambas especies no se
observó la presencia de alcaloides, taninos,
polifenoles, saponinas, glicósidos y flavonoides. Es
de hacer notar que el metanol, al ser un solvente
muy polar, tiene la capacidad de extraer en su gran
mayoría los metabolitos secundarios presentes en
las hojas.
Familia de metabolitos C. citratus M. ofcinalis
% de metabolitos
pertenecientes a la misma
familia química
Saponinas - - 0
Taninos y polifenoles - - 0
Glicósidos cardiotónicos - - 0
Glicósidos cianogénicos - - 0
Alcaloides - - 0
Cumarinas + - 50
Metilencetonas + - 50
Flavonoides - - 0
Esteroles insaturados + + 100
Triterpenos + + 100
Fenilpropanoides + + 100
Antraquinonas - - 0
Catequinas + + 100
% de metabolitos presentes
en cada extracto
46,15 30,77
Tabla 1. Familia de metabolitos secundarios presentes en el extracto metanólico
de las hojas de las especies en estudio.
algunos compuestos orgánicos como taninos,
polifenoles, flavonoides, glicósidos, alcaloides
y esteroides en los extractos, y terpenos en las
esencias (16). Sin embargo, la mayoría de estos
metabolitos no fueron detectados en los extractos
orgánicos analizados tanto de C. citratus como de
M. officinalis.
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Tabla 2. Citotoxicidad del extracto de metanol de C. citratus frente a A. salina
Tabla 3. Concentración letal media (CL50) del extracto de metanol de C. citratus
Control: Solución de dimetilsulfóxido (500μl) en 3,6ml de agua de mar.
Actividad letal o tóxica.
Este bioensayo es un indicador de la actividad antitumoral
de extractos vegetales y/o compuestos químicos
presentes en los mismos. Inicialmente, se determinó que
existe una correlación positiva entre la mortalidad de las
larvas de Artemia y la citotoxicidad frente a las células
cancerígenas. De este modo, es posible detectar y
entonces monitorear el fraccionamiento de extractos con
actividad citotóxica, utilizando el ensayo de mortalidad
de larvas, más que otros ensayos antitumorales in vivo o
in vitro que resultan más tediosos y costosos (17).
La Tabla 2 muestra el porcentaje de mortalidad del
extracto en metanol de C. citratus frente a larvas de
La Tabla 4 revela el porcentaje de mortalidad del
extracto metanólico de las hojas de M. officinalis
frente a larvas de A. salina, con la variación de
las concentraciones, observándose que a mayor
concentración mayor porcentaje de larvas muertas;
es evidente que a la concentración de 100 µg/ml
hay un porcentaje de organismos muertos mayor
a la media de organismos bioensayados (53,3%)
y que a la más baja concentración, no hubo
mortalidad.
A. salina, ensayada a distintas concentraciones del
extracto, observándose que a mayor concentración,
hubo un mayor porcentaje de larvas muertas,
especícamente un 20%de los organismos murieron a
una concentración de 100 µg/ml y no hubo mortalidad
en los rangos de 1 a 10 µg/ml. Adicionalmente, la Tabla
3 presenta la concentración letal media del extracto de
metanol de C. citratus (CL50 = 358,03 µg/ml), resultado
validado con el método estadístico Moving Average,
dentro de los límites de conanza, determinándose
por lo tanto que el extracto de las hojas de C. citratus
es moderadamente tóxico según las Categorías de
toxicidad del CYTED (18).
Concentraciones
( µg/ml )
N° de nauplios
Expuestos Muertos Porcentaje (%)
de mortalidad
1000 31 25 80,6
100 30 6 20,0
10 30 0 0,0
1 30 0 0,0
Control 30 2 6,7
Método Estadístico
CL
50
(μg/ml)
Límites de conanza del 95%
Mínimo Máximo
Binomial 358,03 100,00 1000,00
Moving Average 358,03 236,14 558,99
Probit 366,31 231,78 589,14
Logit 336,89 0,00 ∞
La Tabla 5 muestra una CL
50
de 72,25 µg/ml para
el mismo extracto de M. officinalis, usando método
estadístico Moving Average, dentro de los límites
de confianza. Por lo tanto, se podría decir que este
extracto posee una letalidad muy significativa,
más potente que el extracto de C. citratus, siendo
considerado como altamente tóxico según las
Categorías de toxicidad del CYTED (18).
CL
50:
358,03 μg/ml
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Concentraciones
( μg/ml )
N° de nauplios
Expuestos Muertos
Porcentaje (%) de
mortalidad
1000 30 30 100,0
100 30 16 53,3
10 30 4 13,3
1 30 0 0,0
Control 30 2 6,7
Tabla 4. Citotoxicidad del extracto de metanol de M. officinalis frente a Artemia salina
Tabla 5. Concentración letal media (CL50) del extracto de metanol de M. officinalis
CL
50:
72,25 μg/ml
Control: Solución de dimetilsulfóxido (500μl) en 3,6ml de agua de mar.
Método
Estadístico
Límites de conanza del 95%
CL
50
(μg/ml)
Mínimo Máximo
Binomial 100,00 10,00 1000,00
Moving Average 72,25 45,19 122,11
Probit 82,04 51,04 132,07
Logit 90,31 52,46 180,70
A pesar de que la CL
50
de M. officinalis es
mucho menor y más letal que la de C. citratus,
probablemente, ambos son considerados letales
y podrían poseer compuestos bioactivos, ya que
tienen un CL
50
< 1000 µg/ml (13). Este efecto
letal o tóxico observado para ambos extractos
metanólicos frente a nauplios de A. salina, se
debería posiblemente a la presencia de metabolitos
secundarios pertenecientes a las familias de:
cumarinas, metilencetonas, esteroles insaturados,
triterpenos y fenilpropanoides detectados en los
ensayos fitoquímicos realizados.
Un estudio reciente realizado sobre la composición
química y actividad biológica de cuatro especies
del género Cymbopogon, demostró la citotoxicidad
y la actividad antitripanosomal/antiplasmodial in
vitro de sus aceites esenciales (19), lo que está
en concordancia con la actividad tóxica observada
para C. citratus en esta investigación.
Actividad antibacteriana.
Los extractos metanólicos fueron probados frente
a Escherichia coli, Staphylococcus aureus y
Pseudomonas aeruginosa, mostrando inactividad
contra estas cepas bacterianas. Sin embargo, esto
no implica que frente a otros microrganismos no
puedan presentar cierta actividad inhibitoria (20).
En la Tabla 6 se muestran los valores de los halos
de inhibición que se obtuvieron en los medios
de cultivo sembrados con las cepas de bacterias
mencionadas, luego de ser expuestos a una
solución de una concentración de 20 mg/ml de
cada uno de los extractos metanólicos. Se puede
observar que el extracto de C. citratus presentó
mayor actividad antibacteriana contra la cepa de
E. coli., P. aeruginosa y S. aureus, es decir contra
todas las bacterias bioensayadas.
A diferencia de los halos de inhibición medidos,
luego de que las bacterias fueron sembradas en
los medios de cultivo y expuestas al efecto de
una solución de 40 mg/ml de cada extracto (Tabla
7). Se puede observar que el extracto de M.
officinalis mostró un mayor efecto antibacteriano
que el de C. citratus, contra la cepa de E. coli. En
término general, es evidente que la sensibilidad
bacteriana de las cepas P. aeruginosa y S. aureus
frente al extracto de C. citratus fue mayor a una
concentración de 20mg/ml, en relación a lo
observado para el extracto de M. officinalis.
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Tabla 6. Actividad antibacteriana de una solución de 20 mg/ml de los
extractos metanólicos de las hojas de ambas especies
Tabla 7. Actividad antibacteriana de una solución de 40 mg/ml de los
extractos metanólicos de las hojas de ambas especies.
Tabla 8. Actividad antifúngica de los extractos metanólicos de las hojas
de ambas especies
a: media de los valores de dos réplicas; b: antibiótico de referencia; disco de 6 mm de diâmetro
a: media de los valores de dos réplicas; b: antibiótico de referencia; disco de 6 mm de diámetro
a: media de los valores de dos réplicas; b: antifúngico de referencia; disco de 6 mm de diámetro
Los extractos de plantas tienen un gran potencial
como compuestos antimicrobianos contra
microorganismos. En estudio realizado en Brasil,
se evaluó la actividad antimicrobiana de extractos
de plantas y fitoquímicos con microorganismos
susceptibles y resistentes a antibióticos,
observándose que la asociación de antibióticos
y extractos de plantas mostró una actividad
antibacteriana sinérgica contra las bacterias
resistentes a los antibióticos. Entre ellas la cepa
de Pseudomonas aeruginosa fue inhibida por
M. officinalis y otros extractos ensayados (21).
En otra investigación llevada a cabo en varias
especies del género Melissa, se reportó que sus
hojas también presentan actividad antibacteriana y
antiviral, como se mencionó previamente (7).
Actividad antifúngica.
En el bioensayo de evaluación de la sensibilidad
fúngica de una cepa especifica de hongo, se
Bacterias
Halos de inhibición (mm) promedios
a
C. citratus M. ofcinalis Ciprooxacino
b
E. coli 14 6 36
P. aeruginosa 31 12 41
S. aureus 36 12 43
Bacterias
Halos de inhibición (mm) promediosa
C. citratus M. ofcinalis Ciprooxacino
b
E. coli 6 15 45
P. aeruginosa 9 13 44
S. aureus 11 13 48
observó la formación de halos de inhibición en los
medios de cultivo sembrados con C. albicans, luego
de ser expuestos a diferentes concentraciones (20
y 40 mg/ml) de ambos extractos (C. citratus y M.
officinalis), lo que confirma la acción inhibitoria del
crecimiento de C. albicans.
El extracto que mostró un efecto antifúngico
mayor (acción inhibitoria moderada) a ambas
concentraciones, fue el de C. citratus; sin embargo,
se puede decir que C. albicans exhibió una
sensibilidad antifúngica moderada y similar frente
a ambos extractos ensayados. Estos resultados
obtenidos están en concordancia con un estudio
realizado con extractos de hojas de Rosmarinus
officinalis y Melissa officinalis, dichos extractos
presentaron propiedades antifúngicas sobre
especies de hongos aisladas del género Candida;
aunque el de Melissa officinalis mostró halos de
inhibición de mayor diámetro (22).
Hongo
Concentración
(mg/ml)
Halos de inhibición (mm) promediosa
C. citratus M. ofcinalis Cloranfenicol
b
C. albicans 20 12 11 42
C. albicans 40 19 17 45
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CONCLUSIONES
La hojas de las plantas estudiadas exhibieron un
efecto antibacteriano y antifúngico signicativo contra
las cepas de bacterias Gram (+) y Gram (-), y hongo
ensayado (C. albicans).
Ambas especies vegetales analizadas constituyen
una fuente promisoria de compuestos químicos
antimicrobianos y antitumorales.
Algunos de los metabolitos secundarios detectados
en los extractos de ambas plantas, podrían ser
responsables de la antibiosis observada en las
pruebas de actividad biológica, y se podría inferir
que dichas plantas, usadas tradicionalmente en la
medicina popular de Ecuador, constituyen una fuente
promisoria de compuestos químicos de interés
farmacológico.
Agradecimientos
Los autores expresan su agradecimiento al Proyecto
Prometeo de la Secretaría Nacional de Educación
Superior, Ciencia y Tecnología de la República de
Ecuador (SENESCYT) por el nanciamiento de esta
investigación.
REFERENCIAS
1. Fonnegra R, Jiménez S. Plantas medicinales
aprobadas en Colombia. Colombia: Universidad
de Antioquia; 2007. 343p.
2. Ortuño M. Manual práctico de aceites esenciales,
aromas y perfumes. España: AIYANA; 2006. p
223-224.
3. Oliveira M, Velázquez D, Bermúdez A. La
investigación etnobotánica sobre plantas
medicinales. Revista de Ciencia y Tecnología de
América. 2005; 30 (8): 453-459.
4. De La Torre L, Alarcón D, Kvist L, Salazar J. Usos
medicinales de las plantas. Enciclopedia de las
plantas útiles del Ecuador. Ecuador: Herbario
QCA & Herbario AAU; 2008. p 105–114.
5. Cabrera Y, Fadragas A, Guerrero L. Antibióticos
naturales. Mito o realidad. Revista Cubana de
Medicina General Integral. 2005; 21 (3-4):1-2.
6. Santin M, Dos Santos A, Nakamura C, Dias B,
Ferreira I, Ueda-Nakamura T. In vitro activity of the
essential oil of Cymbopogon citratus and its major
component (citral) on Leishmania amazonensis.
Parasitol Res. 2009; 105(6): 1489-96.
7. Sánchez E, León M, Chávez D, Hechevarría I, Pino
J. Caracterización farmacognóstica de Melissa
ocinalis (toronjil). Rev Cubana Plant Med. 2010;
15 (4): 198-208.
8. Murillo E, Méndez J. Guía metodológica para
la detección rápida de algunos metabolitos
secundarios y caracterización de una droga
cruda. Colombia: Universidad de Tolima; 2011.
9. Marcano D, Hasegawa M. Fitoquímica Orgánica.
Venezuela: Universidad Central de Venezuela-
Torino; 2002. 128p.
10. Bauer A, Kirby A, Sherries J, Turk M. Antibiotic
susceptibility testing by standardized single disk
method. American Journal of Clinical Pathology.
1966; 45 (4): 493-496.
11. Madubunyi I. Antimicrobial activities of the
constituents of Garcinia kola seeds. Intern. J.
Pharm. 1995; 33(3): 232-237.
12. Stephan CE. Methods for calculating an LC50.
In: Mayer FL, Hamelink J. Editors. Aquatic
Toxicology and Hazard Evaluation: ASTM STP
634. Philadelphia: American Society for Testing
and Material; 1977. p 65-84.
13. Meyer B, Ferrigni N, Putnam J, Jacobsen L, Nicols
D, McLaughlin J. Brine shrimp: A convenient
general bioassay for active plant constituents.
Planta Médica. 1982; 45(1): 31-34.
14. World Health Organization. WHO. Monographs
on Selected Medicinal Plants; 1999. p 295.
Disponible en: http://apps.who.int/medicinedocs/
pdf/s2200e/s2200e.pdf.
15. Betancourt E, González Y, Escobar R, Bermúdez
D, Blanco F, Martínez C. Evaluación del potencial
hipolipemiante de Cymbopogon citratus S. en
un modelo de hiperlipidemia aguda. Medicentro
Electrónica. 2015; 19 (1): 2-12.
16. Moradkhani H, Sargsyan E, Bibak H, Naseri B,
Sadat-Hosseini M, Fayazi-Barjin A, Meftahizade
H. Melissa ofcinalis L., a valuable medicine plant:
A review. Journal of Medicinal Plant Research.
2010; 4(25): 2753-2759.
17.:Pino O, Lazo J. Ensayo de Artemia: útil
herramienta de trabajo para ecotoxicólogos y
químicos de productos naturales. Revista de
Protección Vegetal. 2010; 22 (1): 35-36.
18. CYTED. (Ciencia y Tecnología para el Desarrollo).
Programa Iberoamericano de Ciencia y Tecnología
para el Desarrollo. Manual de Técnicas de
Investigación. España: Editor Pinzón; 1995, p 45-
49.
Vélez et al. Metabolitos secundarios, actividad antimicrobiana y letalidad pp. 31-39
│ 39
e - ISSN: 2602-8360 - Volumen. 2, Nº 2, Junio – Noviembre 2018
19. Kpoviessi B, Accrombessia G, Frédériche
M, Moudachirouc M, Quetin-Leclercq J.
Chemical composition, cytotoxicity and in vitro
antitrypanosomal and antiplasmodial activity of
the essential oils of four Cymbopogon species
from Benin. J Ethnopharmacol. 2014; 151(1):
652-9.
20. Mora J, Newmark F, Santos M, Sánchez
J. Evaluación de extractos de esponjas
marinas como nuevas fuentes de sustancias
antimicrobianas. Rev. Esp. Quimioter. 2008; 21
(3): 174-179.
21. Gislene G, Nascimento F, Locatelli J, Freitas P,
Silva G. Antibacterial activity of plant extracts and
phytochemicals on antibiotic resistant bacteria.
Brazilian Journal of Microbiology. 2000; 31: 247-
256.
22. Márquez G. Actividad antifúngica de Rosmarinus
ofcinalis (romero) y Melissa ofcinalis (toronjil)
contra especies del género Candida, aisladas de
pacientes con vulvovaginitis. Trabajo de grado.
Venezuela: Universidad de Oriente; 2012. 45p.
